Заготовка сырья – процесс экономически выгодный и нетрудоемкий. Процесс выделения пектина лишен технологической трудоемкости. Пектин обладает активной комплексообразующей способностью по отношению к радиоактивному кобальту, стронцию, цезию, цирконию, рутению, иттрию и другим металлам. В процессе усвоения пектин превращается в пектиновую кислоту, которая соединяется с тяжелыми металлами и радионуклидами, образуя нерастворимые соли, выделяемые из организма естественным путем. При постоянном его применении накопления вредных веществ в организме не происходит [1,3]. Сочетание широкого спектра фармакологических свойств, а также отсутствие токсического воздействия на организм, открывают широкие возможности для применения пектинового комплекса выделенного из листьев ореха.
Целью настоящей работы являлось выделение полисахаридого комплекса из листьев ореха грецкого и идентификация его моносахаридного состава.
Объектом исследования являлись листья ореха грецкого, собранные в июле-августе 2014 года. Сырьё высушивали в тени, измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 5 мм.
Выделение полисахаридов по фракциям: I - ВРПС (водорастворимые полисахариды), II – ПВ (пектиновые вещества), III - Гц А (гемицеллюлоза А) и IV – Гц Б (гемицеллюлоза Б) из листьев ореха грецкого проводили по методу Н.К. Кочеткова и M. Sinnerа [1].
Выделение ВРПС: сырьё экстрагировали водой при комнатной температуре и постоянном перемешивании в течение 24 часов (соотношение сырья и экстрагента – 1:15). Полученное извлечение фильтровали, полисахариды из фильтрата осаждали двойным объёмом 95% спирта этилового. Водно-спиртовую смесь далее центрифугировали в течение 15 минут при частоте вращения - 3000 об/мин. Осадок количественно переносили в выпарительную чашечку и сушили в эксикаторе до постоянной массы.
Выделение ПВ: оставшийся шрот после выделения ВРПС экстрагировали на водяной бане при 100С и постоянном перемешивании в течение часа смесью 0,5% раствора оксалата аммония и 0,5% раствора щавелевой кислоты (1:1). Далее извлечение фильтровали через несколько слоёв марли и добавляли один объём спирта этилового 95%-го для осаждения ПВ. Осадок отделяли центрифугированием при тех же условиях и осадок сушили в эксикаторе.
Выделение Гц А: шрот, оставшейся после выделения ПВ, обрабатывали 7% раствором гидроксида натрия 17 часов. Извлечение фильтровали через несколько слоёв марли и доводили до рН 6-7 ледяной уксусной кислотой при этом выпадал осадок Гц А. Далее центрифугировали и переносили осадок в выпарительную чашку и сушили до постоянной массы.
Выделение Гц Б: надосадочную жидкость после выделения Гц А ставили на диализ через полупроницаемую мембрану против воды на 18 часов. Остаток жидкости переносили в плоскодонную колбу и обрабатывали двойным объёмом спирта этилового 95%. Выделившийся осадок Гц Б отделяли центрифугированием аналогично описанному выше и сушили до постоянной массы [2].
Для установления моносахаридного состава выделенных фракций проводили гидролиз 2н кислотой серной при 100С в течение 10 часов для водорастворимых полисахаридов и в течение 48 часов для остальных полисахаридных комплексов. Гидролизат нейтрализовали карбонатом бария по универсальному индикатору до нейтральной реакции, фильтровали, упаривали на водяной бане до небольшого остатка и хроматографировали. Моносахариды после кислотного гидролиза идентифицировали методом восходящей бумажной хроматографии путём сравнения с достоверными образцами свидетелей. Хроматограммы высушивали на воздухе и обрабатывали анилинфталатным реактивом, с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100-110С в течение 15-20 минут. На хроматограмме наблюдали появление пятен моносахаридов различной окраски [1,2]. Обобщённые данные, касающиеся полисахаридного комплекса, представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Качественный и количественный состав полисахаридов листьев ореха грецкого (Júglans régia)
Фракции |
Содержание фракций % |
Внешний вид полученных фракций |
Обнаруженные моносахариды после гидролиза |
ВРПС |
1,1 |
Кристаллический порошок, розового цвета, с характерным запахом, кисловатого вкуса, растворим в воде |
глюкоза, арабиноза, рамноза |
ПВ |
14,4 |
Кристаллический порошок, коричневатого цвета, сладковатого вкуса, без запаха, растворим в воде |
глюкоза, арабиноза, рамноза, галактуроновая кислота |
Гц А |
17,8 |
Коричневатый порошок, без запаха, кисловатого вкуса, не растворим в воде |
глюкоза, арабиноза |
Гц Б |
0,5 |
Темно-коричневатый порошок, без запаха, кисловатого вкуса, не растворим в воде |
глюкоза, арабиноза |
Выводы
В водорастворимой фракции обнаружены глюкоза, арабиноза и рамноза; фракция ПВ представлена глюкозой, арабиноза, рамнозой и галактуроновой кислотой; во фракции Гц А обнаружены глюкоза и арабиноза, а Гц Б представлена глюкозой и арабиноза. Гравиметрический анализ указывает на преобладание ПВ и Гц А.
Литература
Кочетков, Н.К. Химия биологически активных соединений / Н.К. Кочетков.– М., 1970. - 631 с.
Оводов, Ю.С. Современные представления о пектиновых веществах / Ю.С. Оводов // Биоорган, химия. 2009.- Т. 35, № 3. - С. 293-310.
Полисахариды Fabaceae V. α-глюкана из корней Sophora flavescens ROOTS / Д. Н. Оленников [и др.] // Химия природных соединений.- 2011.- № 1. - С. 47.