XII Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся

Старт в науке

Что такое коронавирус?

• Авторы
• Руководители
• Файлы работы
• Наградные документы

Зубова П.В. 1

---

1АНОО "Ломоносовская школа "Зелёный мыс"

Сивопляс Е.А. 1

---

1АНОО "Ломоносовская школа - Зелёный мыс", МПГУ

Работа в формате PDF

6.1 MB

Автор работы награжден дипломом победителя II степени

Диплом школьникаСвидетельство руководителя

ВВЕДЕНИЕ

В наше время появилось новое вирусное заболевание под названием Covid-19 или коронавирус, которое почти сразу перевернуло наш мир с ног на голову. Мы все стали носить маски и перчатки в общественных местах, использовать литры антисептиков и пугаться любого кашля или чиха рядом с нами. Причина паники кроется в отсутствии подтвержденных фактов и распространения слухов.

Поэтому целью моего проекта стало исследовать коронавирус и методы его изучения.

Для достижения данной цели мы поставили перед собой следующие задачи:

Изучить структуру вируса и историю его возникновения

Проанализировать открытые статистические данные

Изучить методы исследования вирусов

Посетить лабораторию молекулярно-биологического анализа коронавируса

Провести опрос среди учеников и сотрудников школы АНОО «Ломоносовская школа – Зеленый мыс»

Составить памятку по коронавирусу для учеников и сотрудников школы

Изучить особенности вакцины от коронавируса

Провести биоинформационный анализ

Актуальность проблемы. В настоящее время проблема изучения и борьбы с коронавирусом актуальна для всех, ведь каждый из нас подвергнут риску заболевания. В группе риска находятся дети, пожилые люди, люди с онкологическими заболеваниями, с заболеваниями сердца и т. д.

Сейчас продолжается так называемая «вторая волна» данного заболевания. По данным на конец января каждый день в России выявляется более 19 тысяч заболевших, всего выявлено около 103 миллионов заболевших, из которых около 57 миллионов выздоровели.

На данный момент уже проведено более 102 миллионов тестов.

В России произведена первая в мире вакцина от коронавируса, и мы решили выяснить, на основе чего она работает.

Обзор литературных данных

Само название коронавирус показывает нам то, что это вирус, поэтому сначала более подробно познакомимся с ними.

1.1 Вирусы

Предполагается, что общее число вирусных частиц на порядок выше количества всех клеток всех организмов на Земле [4]. Вирусы окружают нас повсюду в живой природе, и каждая клетка каждого организма несет в себе следы прошлых встреч с ними.

Вирусы — это неклеточные формы жизни, различимые только под электронным микроскопом. Это внутриклеточные паразиты. За пределами клетки они не проявляют своих свойств и имеют кристаллическую форму [2].

1.2 История возникновения коронавируса

Все, наверняка, слышали недовольные возгласы по типу «коронавирус уже давно существует, почему только сейчас он появился?» и, конечно же миф о том, что «коронавирус – это просто иностранное оружие». Но давайте ознакомимся с информацией от февраля 2020 года.

Сравнивая организмы друг с другом, эволюционные биологи многое могут узнать про их историю. Больше всего материала для сравнения содержится в нуклеотидных последовательностях, в случае коронавирусов – в последовательностях РНК. Текущая вспышка – пожалуй, первый случай возникновения нового патогена, когда генетические данные есть почти с самого начала. Первая последовательность «нового» коронавируса (nCoV) появилась в открытом доступе всего через несколько недель после описания первых случаев. Для сравнения: при вспышке SARS (тяжелого острого респираторного синдрома, также вызываемого коронавирусом) 2002/2003 года первых последовательностей пришлось ждать много месяцев [5].

Неизвестно, как мутации, отличающие nCoV от штаммов, распространенных у животных, изменили его характеристики и изменили ли вообще. Возможно, перескок был несчастной случайностью, не сопровождавшейся никакими изменениями генетических характеристик вируса по сравнению с его предками у диких животных.

1.3 Механизм развития коронавирусной инфекции

«Перескочив» в людей, вирус продолжил эволюционировать, «прорастив» ветвистое эволюционное древо уже в людях (рис. 4). К сожалению, сегодня известны лишь очень немногие «листья» этого древа. Самые новые последовательности из Уханя датируются 3 января, и 42 из 47 известных сегодня последовательностей получены снаружи Китая. Тем не менее, изучая древо, можно понять довольно много.

Рисунок 4. Эволюционное древо Covid-19.

Во-первых, можно установить скорость эволюции вируса. Для этого нужно сопоставить даты инфицирования с числом отличий последовательности вируса от «предковой». По текущим оценкам, скорость составляет порядка 0,001 замен на нуклеотид в год. Это сопоставимо с таковой у других РНК-содержащих вирусов, например, у гриппа. Это может означать, что, как в случае с гриппом, трудно будет создать универсальную вакцину, защищающую от всех штаммов, и вакцина потребует периодического обновления.

Во-вторых, можно проследить пути передачи. Первые надежные данные о передаче от человека человеку были получены именно таким образом.

В-третьих, можно оценить скорость распространения вируса, а именно ставший знаменитым в последние дни показатель Rо. Rо, или базовое репродуктивное число, — это число людей, зараженных одним инфицированным за все время течения болезни в полностью уязвимой популяции.

1.4 Динамика заболеваемости в России

Это объясняется увеличением объемов бесплатного тестирования, но процент выявляемости также повышен с 10% до 13%. Вопреки прогнозам мэра, многие уверены в городе ожидается вторая волна коронавируса, из-за которой снова будут вводиться ограничительные мероприятия.

В течение всей эпидемии создавалась статистика возраста заболевших коронавирусом (рис. 5).

Что же происходит сейчас?

Интересно отметить, что в связи с повсеместным использованием средств индивидуальной защиты в период эпидемии отмечается резкое снижение заболеваемости гриппом (рис. 6)

Тема коронавируса активно исследуется в научной сфере, что ярко отображается в динамике публикационной активности (рис. 7). Первая публикация появилась в 1981 году, затем в последующие годы эта тема мало освещалась до 2019 года, когда вышло 272 статьи, а в 2020 данной тематике посвящено уже 89,5 тысяч публикаций. В 2021 году данная динамика скорее всего сохранится, так как на конец января по данным NCBI уже вышло почти 12 тысяч статей.

Рисунок 7. Статистика публикаций по коронавирусу.

1.5 Методы изучения вирусов

Методы исследования, применяемые в вирусологии, отличаются значительной сложностью, что связано прежде всего с абсолютным внутриклеточным паразитизмом вирусов и их малыми размерами. Существует достаточно много молекулярно-биологических методов изучения вирусов, например, ПЦР или культуральный метод. Но сейчас я расскажу о методах исследования различных вирусных инфекций и коронавируса конкретно.

При исследовании материалов, полученных от больных вирусными инфекциями, с целью лабораторной диагностики этих заболеваний применяются различные методы:

Методы электронной микроскопии

Метод иммунофлюоресценции

ИФА

Полимеразная цепная реакция

Метод молекулярной гибридизации

Секвенирование генома

Теперь о каждом более подробно.

1. Электронная микроскопия

Электронная микроскопия — это метод исследования структур, находящихся вне пределов видимости светового микроскопа и имеющих размеры менее одного микрона (от 1 мк до 1-5 A).

2. Метод иммунофлюоресценции

3. ИФА

Иммуноферментный анализ — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных низкомолекулярных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело.

4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

7. Секвенирование генома

Секвенирование биополимеров (белков и нуклеиновых кислот – ДНК и РНК) — это определение их первичной аминокислотной или нуклеотидной последовательности. Раньше требовалось несколько человек и достаточно много времени для секвенирования, так как это делалось вручную (рис. 12). Сейчас появились специальные приборы для секвенирования поэтому это стало в разы быстрее (рис. 13). (уменьшились также размеры и стоимость этих приборов).

Рисунок 12. Результат секвенирования по Сэнгеру.

Рисунок 13. Современные приборы для секвенирования.

8. Биоинформационный анализ

Биоинформатика – развивающаяся междисциплинарная область, которая объединяет в себе общую и молекулярную биологию, кибернетику, генетику, химию, математику, статистику и информатику [13]. В настоящее время в открытых базах данных выложено много информации, но нужно суметь ее проанализировать. Именно этим занимается биоинформационный анализ.

1.6 Ген и его структура

Хотя гены присутствуют в виде сегментов ДНК во всех клеточных формах жизни, есть некоторые вирусы, генетическая информация которых находится в форме РНК. РНК-вирусы заражают клетку, которая затем немедленно начинает производить белки в соответствии с инструкциями вирусной РНК; транскрипция ДНК в РНК не требуется.

Для генов прокариот характерна оперонная структура. Оперон – это группа генов, которая контролирует один биохимический процесс. Например, широко известен лактозный оперон, который кодирует 3 гена метаболизма лактозы у бактерий.

1.7 Вакцины и методы их создания

ДНК- и РНК-вакцины

У РНК-вакцин есть отдельные преимущества:

матричная РНК не накапливается в организме, так как расщепляется специальными ферментами (рибонуклеазами);

эти вакцины просты в разработке, и их производство можно наладить довольно

Недостатки ДНК- и РНК-вакцин:

Они не тестировались на больших количествах добровольцев

ДНК проникает в ядро клетки и потенциально может встроиться в геном.

ДНК может терять стабильность при хранении, а РНК — быстро разрушаться в клетках.

Нуклеиновые вакцины менее иммуногены.

Нуклеиновые кислоты кодируют образование белков, поэтому вакцины на их основе невозможно использовать против возбудителей с полисахаридной оболочкой (пневмококки, менингококки).

Векторные вакцины

Чтобы иммунитет не узнал вектор, используют вирусы, которые либо вообще не циркулируют среди людей (например, аденовирус шимпанзе), либо крайне редки или использовать два разных вирусных вектора. Данную технологию применяли специалисты НИИ им. Гамалеи при разработке вакцины против SARS-CoV-2.

Векторные вакцины на основе реплицирующегося вируса

С ними немного сложнее, так как это конструкция два-в-одном: берут уже существующий живой вакцинный вирус (например, вирус гриппа или кори), в геном которого встраивают нужный ген SARS-CoV-2. Попадая в клетки, такая вакцина должна обеспечивать защиту против кори или гриппа и COVID-19.

Живые, инактивированные, вирусоподобные и белковые вакцины

Фазы исследований вакцины

I фаза: исследование проводят на небольшом количестве добровольцев (до 50 человек). На этой стадии проверяют безопасность, выбирают приемлемую дозировку.

II фаза: вакцину прививают большему количеству добровольцев (обычно участвуют до 500 человек). Задача— проверка безопасности и иммуногенности, вводят плацебо-контроль.

Совмещенные исследования I/II фаз.

III фаза: участие принимают несколько тысяч добровольцев, проверяют эффективность вакцинации в защите от естественного заболевания.

Регистрация вакцины.

Постлицензионные исследования.

Перечень разрабатываемых вакцин от COVID-19 

В стадии исследований на добровольцах находятся более 20 вакцин:

мРНК-вакцина американской компании Moderna (идет III фаза на 30 000 добровольцах)

Векторные вакцины от: 

Центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» (I/II фаза);

University of Oxford и компании AstraZeneca (II фаза исследований в Великобритании и III — в Бразилии и Южной Африке);

ДНК-вакцина от Inovio (закончена I фаза); 

инактивированная вакцина от Bharat Biotech (I/II фаза); 

инактивированная вакцина от Sinopharm (III фаза);

и другие.

В России вышли 3 вакцины [10-12]. На основании анализа предлагаемых вакцин мы создали таблицу (Приложение, Таблица 1):

У каждой из данных вакцин присутствуют свои побочные эффекты и противопоказания, о чем вам подробно расскажут перед вакцинацией.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ

Посещение лаборатории по выявлению коронавируса.

6 ноября 2020 года мы посетили лабораторию молекулярно-биохимических исследований Invitro (город Москва). В данной лаборатории проводится множество видов анализа, но наибольшее внимание мы уделили исследованиям по коронавирусу (см. Приложение 1). Большинство исследований автоматизировано. Был показан микробиологический отдел, в котором стоит роботизированная система WASP (см. Приложение 1), объединившая в себе автоматизированный процесс микробиологического посева, приготовление мазка и пересев в бульон.

В отделе биохимии в основном работают с образцами крови, там стоят поточные гематологические анализаторы Sysmex (см. Приложение 1).

Самое интересное было в отделе молекулярной биологии, где, в частности, проходит исследование проб на covid-19. Выделение ДНК происходит с помощью процессора магнитных частиц KingFisher Flex (см. Приложение 1).

Затем ставится real-time ПЦР, причем таких амплификаторов большое количество (см. Приложение 1).

Лаборатория in vitro очень современная, множество этапов анализа автоматизировано с применением соответствующей техники.

Опрос

12-13 ноября 2020 года мы провели опрос среди учащихся и работников АНОО «Ломоносовская школа – Зеленый мыс». Я опросила учеников из 4-11 классов, а также сотрудников. В опросе приняло участие 104 человека.

На вопрос «что такое коронавирус?» ответили 104 человека, среди них 60% сказали, что это вирус, 13% - болезнь или заболевание, 3% - Covid-19, 14% - предложили другие варианты ответа, а 10% ничего не ответили на данный вопрос.

Диаграмма 1 «что такое коронавирус?»

Внутри ответа «вирус» наблюдалась вариация: 8% сказали, что это грипп, а 6% - что это ОРВИ, а 86% никак не конкретизировали свой ответ.

Диаграмма 2 «Вирус»

Среди 104 опрошенных на вопрос «сколько человек из вашего окружения болели коронавирусом?» 40 человек ответили, что в их окружении не было заболевших, а при суммировании остальных ответов получилось 271 заболевший.

Мы проанализировали ответы, в которых указано в каком месяце люди переболели коронавирусной инфекцией. Заболевших с указанием месяца протекания заболевания оказалось 240 человек. Мы построили график, с учетом того, что в России данное заболевание впервые было диагностировано в феврале 2020 года.

График 1. Динамика заболеваемости коронавирусом.

Динамика заболеваемости по месяцам показала нам, что число заболевших во время второй волны намного превышает число заболевших во время первой волны.

К тому же, наш график полностью совпал с официальной статистикой по стране (рис. 5).

Мы проанализировали ответы, в которых был указан возраст заболевших.

Гистограмма 1. Количество заболевших коронавирусом по возрастам.

Результаты, представленные нами на гистограмме, показывают нам, что большая часть заболевших находится в возрасте от 40 до 50, что опять же совпадает со статистикой по стране (см. Раздел 1.4).

Составление памятки

После проведенного опроса мы решили составить памятку, содержащую информацию о мифах и методах борьбы с коронавирусом. Данную памятку мы представили ученикам и сотрудникам АНОО «Ломоносовской школы – Зеленый мыс» (см. Приложение 2).

Биоинформационный анализ

Используя открытую базу данных NCBI [14], мы рассмотрели структуру генома коронавируса (рис.17). Он содержит 29 903 пары нуклеотидных оснований (см. Приложение 3). Основную его часть составляет последовательности белка ORF. Это первый вирусный белок, создаваемый внутри зараженной клетки, он представляет собой цепь из 16 объединенных вместе белков [7]. Например, протеиназы разрывают связи между различными протеинами. Также присутствуют белки, содержащие трансмембранные домены для проникновения внутрь клетки. Хеликаза разрывает цепи ДНК во время копирования. РНК-полимераза участвует в синтезе новой цепи РНК.

Рисунок 17. Геномкоронавирусаsevere acute respiratory syndrome coronavirus 2 isolate Wuhan-Hu-1, complete genome (NCBI).

Мы проанализировали нуклеотидную последовательность коронавируса, взятую из открытой базы данных NCBI. Подсчет количества нуклеотидов (таблица 2) показал, что преобладают тиминовые основания, относящиеся к пиримидиновому ряду. На втором месте число аденинов, а гуанин и цитозин в меньшинстве.

Таблица 2. Количество нуклеотидов в геноме коронавируса

Отдельно присутствует последовательность S-белка, который формирует внешний слой коронавируса. Он содержит 3 822 пары нуклеотидных оснований. Именно на анализ последовательности данного белка направлено действие вакцины «спутник-V» российского производства. В трехмерной структуре данного белка мы видим обилие -спиралей, также присутствуют -складчатые слои. Помимо белковых структур еще выделяется 59 остатков замещенного моносахарида глюкопиранозы (2-ацетамидо-2-дезокси--D-гликопираноза) (рис. 19).

Используя программу BLAST [15], мы сравнили последовательность S-белка у различных штаммов коронавируса из базы данных NCBI. Показано 100%-ное соответствие нуклеотидов. Если построить филогенетическое древо, показывающее родство, (рис. 20) по данной последовательности, то почти все обнаруженные варианты коронавируса будут на одной ветви. Это служит доказательством того, что последовательность S-белка консервативна (малоизменчива) у коронавируса человека, поэтому вакцины, разработанные на его основе, будут успешно бороться с вирусом.

Рисунок 20. Филогенетическое древо коронавируса человека по соответствию последовательности S-белка

Используя последовательность гена S-белка из базы данных NCBI, мы составили праймеры для определения наличия последовательности данного белка в исследуемом образце.

Условия подбора праймеров

Анализ кодирующей области гена

Выбор участка длинной примерно 400 пар нуклеотидов

Последовательности, комплементарные праймерам, должны быть насыщены GC нуклеотидами и иметь размер примерно 20 нуклеотидов

Используя программу BLAST, мы проверили созданные нами праймеры во вкладке Primer-BLAST [17] (рис. 21):

CCCTCAGGGTTTTTCGGCTT - прямой праймер 

AGATGCAAATCTGGTGGCGT - обратный праймер 

Комплементарные праймерам последовательности указаны в Приложении 4. Предложенные нами праймеры имеют температуру отжига 60ºС и насыщены GC-парами (50 и 55%). На схеме указано положение

Рисунок 21. Результат проверки праймеров в программе Primer-BLAST.

Данные праймеры могут быть использованы для постановки real-time ПЦР, чтобы определить наличие коронавируса в пробе.

ВЫВОДЫ

На данный момент во всем мире коронавирусная инфекция вышла на первый план. В ходе нашего исследования мы добились следующих результатов:

Изучили структуру вируса и историю его возникновения.

Проанализировали открытые статистические данные.

Изучили методы исследования вирусов и способы создания вакцин.

Посетили лабораторию молекулярно-биологического анализа коронавируса и выявили, что основным методом является проведение real time ПЦР.

Проведенный в ноябре 2020 года опрос среди учеников и сотрудников школы АНОО «Ломоносовская школа – Зеленый мыс» показал, что большинство имеет представление что такое коронавирус. А также заболеваемость среди близкого окружения опрошенных в целом коррелирует с заболеваемостью в стране по месяцам и возрасту заболевших.

Составили памятку, содержащую информацию о мифах и способах борьбы с коронавирусом.

Провели биоинформационный анализ, который показал, что последовательность S-белка консервативна (малоизменчива) у коронавируса человека, поэтому вакцины, разработанные на его основе, будут успешно бороться с вирусом.

Мы разработали пару праймеров, которые могут быть использованы для определения наличия коронавируса в пробе методом real-time ПЦР.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нас окружают миллионы разных частиц, которые стоят на границе живого и неживого – вирусы. Мы можем рассмотреть их только в электронный микроскоп, однако они оказывают на нашу жизнь огромное влияние. Еще год назад мало кто в нашей стране знал, что такое коронавирус, но уже весной это заболевание появилось в нашей стране. Поэтому мы заинтересовались данной тематикой. В настоящий момент о данном заболевании знают даже дети, что и показал наш опрос. Было крайне интересно сравнить динамику заболеваемости коронавирусом по стране с информацией о заболевших, которую нам рассказали ученики и сотрудники нашей школы. Действительно, изменение в заболеваемости полностью совпадает с примерами из жизни конкретных людей. Как официальная статистика по стране, так и данные о заболевших в нашей школе показали, что осенью 2020 года началась вторая волна коронавируса. Эта эпидемия изменила всю нашу жизнь. Во время первой волны весной 2020 года мы учились дистанционно и это было испытанием для нас. Также теперь во всех общественных местах мы пользуемся масками, перчатками и антисептиками. Данное заболевание показало уязвимость человека и важность соблюдения санитарно-гигиенических норм. Надеемся, что применение вакцин поможет человечеству побороть данную опасность. В свою очередь мы разработали праймеры, которые могут быть использованы в медицинской практике для выявления коронавируса.

Список использованной литературы

1) Носик Н. Н., Стаханова В. М. Лабораторная диагностика вирусных инфекций // «Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия», №2 том 2 2000

2) Авакян А. А., Быковский А. Ф. Атлас анатомии и онтогенеза вирусов человека и животных / «Медицина», Москва, 1970, 271 с.

3) Циммер К. Планета вирусов / «Феникс», Ростов-на-Дону, 2012, 78 с.

4) Букринская А. Г. Вирусология / «Медицина», Москва, 1986, 336 с.

5) Ржешевский А. Золотой век вирусов // «Популярная механика» №9, 2015

6) Киселев В. Вирус апокалипсиса // «Химия и жизнь» №4, 2020

7) Корум Дж. и Циммер К. Плохие новости в протеиновой обертке: в геноме у коронавируса (перевод Н. Шевченко) // «The New York Times», 3.04.2020

8) Ремиш А. Гонка во спасение: безопасны ли вакцины против коронавируса? // «Биомолекула», 11.08.2020

9) Callaway E. The race for coronavirus vaccines: a graphical guide // Nature, 580, 576-577; 2020.

10) Logunov D.Y, Dolzhikova I.V, Shcheblyakov D.V, Tukhvatulin A.I, Zubkova O.V, Dzharullaeva A.S, Kovyrshina A.V, Lubenets L.N, Grousova D.M, Erokhova A.S, Botikov AG et al. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. // thelancet.com. «The Lancet» 2.02.2021. doi:10.1016/S0140-6736(21)00234-8.

11) ЭпиВакКорона Вакцина на основе пептидных антигенов для профилактики COVID-19 (EpiVacCorona Vaccine based on peptide antigens for prevention of COVID-19) // Электронный текст инструкции (временной) к препарату на сайте СЛС «Vidal».

12) Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата КовиВак (Вакцина коронавирусная инактивированная цельноварионная концентрированная очищенная) от 19.02.2021 г. // Электронный образ документа на сайте «Государственный реестр лекарственных средств».

13) Гельфанд, М. С. Биоинформатика как дисциплина: Биоинформатик Михаил Гельфанд о системной биологии, предсказании функций белков и процессах эволюции // Постнаука. — 2015. — 28 февраля.

14) https://www.ncbi.nlm.nih.gov

15) https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

16) https://apps.who.int/flumart/Default?ReportNo=6

17) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. Фото с экскурсии в лабораторию Invitro

1. Кабинет пробоподготовки и выделения нуклеиновых кислот

2. Лаборатория общеклинических исследований

3. Лаборатория общеклинических исследований

4. Лаборатория общеклинических исследований

5. Поточные гематологические анализаторы Sysmex

6. Лаборатория биохимии и иммунохимии

7. Лаборатория общеклинических исследований

8. Лаборатория общеклинических исследований

9. Роботизированная система WASP

10. Роботизированная система WASP

11. Отдел молекулярной биологии

12. Отдел молекулярной биологии

13. Отдел молекулярной биологии

14.Процессор магнитных частиц King Fisher Flex

15. Амплификаторы real-time ПЦР

16. Хранилище наборов для исследования инфекционных заболеваний

17. Хранилище наборов для исследования инфекционных заболеваний

2. Памятка «коронавирус и как с ним бороться»

Таблица 1. Сравнение существующих вакцин от коронавируса

3. Последовательностькоронавируса

Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 isolate Wuhan-Hu-1

1 aggtaacaaa ccaaccaact ttcgatctct tgtagatctg ttctctaaac gaactttaaa

61 atctgtgtgg ctgtcactcg gctgcatgct tagtgcactc acgcagtata attaataact

121 aattactgtc gttgacagga cacgagtaac tcgtctatct tctgcagtct gcttacggtt

181 tcgtccgtgt tgcagccgat catcagcaca tctaggtttt gtccgggtgt gaccgaaagg

241 taagatggag agccttgtcc ctggtttcaa cgagaaaaca cacgtccaac tcagtttgcc

301 tgttttacag gttcgcgacg tgctcgtacg tggctttgga gactccgtgg aggaggtctt

361 atcagaggca cgtcaacatc ttaaagatgg cacttgtggc ttagtagaag ttgaaaaagg

421 cgttttgcct caacttgaac agccctatgt gttcatcaaa cgttcggatg ctcgaactgc

481 acctcatggt catgttatgg ttgagctggt agcagaactc gaaggcattc agtacggtcg

541 tagtggtgag acacttggtg tccttgtccc tcatgtgggc gaaataccag tggcttaccg

601 caaggttctt cttcgtaaga acggtaataa aggagctggt ggccatagtt acggcgccga

661 tctaaagtca tttgacttag gcgacgagct tggcactgat ccttatgaag attttcaaga

721 aaactggaac actaaacata gcagtggtgt tacccgtgaa ctcatgcgtg agcttaacgg

781 aggggcatac actcgctatg tcgataacaa cttctgtggc cctgatggct accctcttga

841 gtgcattaaa gaccttctag cacgtgctgg taaagcttca tgcactttgt ccgaacaact

901 ggactttatt gacactaaga ggggtgtata ctgctgccgt gaacatgagc atgaaattgc

961 ttggtacacg gaacgttctg aaaagagcta tgaattgcag acaccttttg aaattaaatt

1021 ggcaaagaaa tttgacacct tcaatgggga atgtccaaat tttgtatttc ccttaaattc

1081 cataatcaag actattcaac caagggttga aaagaaaaag cttgatggct ttatgggtag

1141 aattcgatct gtctatccag ttgcgtcacc aaatgaatgc aaccaaatgt gcctttcaac

1201 tctcatgaag tgtgatcatt gtggtgaaac ttcatggcag acgggcgatt ttgttaaagc

1261 cacttgcgaa ttttgtggca ctgagaattt gactaaagaa ggtgccacta cttgtggtta

1321 cttaccccaa aatgctgttg ttaaaattta ttgtccagca tgtcacaatt cagaagtagg

1381 acctgagcat agtcttgccg aataccataa tgaatctggc ttgaaaacca ttcttcgtaa

1441 gggtggtcgc actattgcct ttggaggctg tgtgttctct tatgttggtt gccataacaa

1501 gtgtgcctat tgggttccac gtgctagcgc taacataggt tgtaaccata caggtgttgt

1561 tggagaaggt tccgaaggtc ttaatgacaa ccttcttgaa atactccaaa aagagaaagt

1621 caacatcaat attgttggtg actttaaact taatgaagag atcgccatta ttttggcatc

1681 tttttctgct tccacaagtg cttttgtgga aactgtgaaa ggtttggatt ataaagcatt

1741 caaacaaatt gttgaatcct gtggtaattt taaagttaca aaaggaaaag ctaaaaaagg

1801 tgcctggaat attggtgaac agaaatcaat actgagtcct ctttatgcat ttgcatcaga

1861 ggctgctcgt gttgtacgat caattttctc ccgcactctt gaaactgctc aaaattctgt

1921 gcgtgtttta cagaaggccg ctataacaat actagatgga atttcacagt attcactgag

1981 actcattgat gctatgatgt tcacatctga tttggctact aacaatctag ttgtaatggc

2041 ctacattaca ggtggtgttg ttcagttgac ttcgcagtgg ctaactaaca tctttggcac

2101 tgtttatgaa aaactcaaac ccgtccttga ttggcttgaa gagaagttta aggaaggtgt

2161 agagtttctt agagacggtt gggaaattgt taaatttatc tcaacctgtg cttgtgaaat

2221 tgtcggtgga caaattgtca cctgtgcaaa ggaaattaag gagagtgttc agacattctt

2281 taagcttgta aataaatttt tggctttgtg tgctgactct atcattattg gtggagctaa

2341 acttaaagcc ttgaatttag gtgaaacatt tgtcacgcac tcaaagggat tgtacagaaa

2401 gtgtgttaaa tccagagaag aaactggcct actcatgcct ctaaaagccc caaaagaaat

2461 tatcttctta gagggagaaa cacttcccac agaagtgtta acagaggaag ttgtcttgaa

2521 aactggtgat ttacaaccat tagaacaacc tactagtgaa gctgttgaag ctccattggt

2581 tggtacacca gtttgtatta acgggcttat gttgctcgaa atcaaagaca cagaaaagta

2641 ctgtgccctt gcacctaata tgatggtaac aaacaatacc ttcacactca aaggcggtgc

2701 accaacaaag gttacttttg gtgatgacac tgtgatagaa gtgcaaggtt acaagagtgt

2761 gaatatcact tttgaacttg atgaaaggat tgataaagta cttaatgaga agtgctctgc

2821 ctatacagtt gaactcggta cagaagtaaa tgagttcgcc tgtgttgtgg cagatgctgt

2881 cataaaaact ttgcaaccag tatctgaatt acttacacca ctgggcattg atttagatga

2941 gtggagtatg gctacatact acttatttga tgagtctggt gagtttaaat tggcttcaca

3001 tatgtattgt tctttttacc ctccagatga ggatgaagaa gaaggtgatt gtgaagaaga

3061 agagtttgag ccatcaactc aatatgagta tggtactgaa gatgattacc aaggtaaacc

3121 tttggaattt ggtgccactt ctgctgctct tcaacctgaa gaagagcaag aagaagattg

3181 gttagatgat gatagtcaac aaactgttgg tcaacaagac ggcagtgagg acaatcagac

3241 aactactatt caaacaattg ttgaggttca acctcaatta gagatggaac ttacaccagt

3301 tgttcagact attgaagtga atagttttag tggttattta aaacttactg acaatgtata

3361 cattaaaaat gcagacattg tggaagaagc taaaaaggta aaaccaacag tggttgttaa

3421 tgcagccaat gtttacctta aacatggagg aggtgttgca ggagccttaa ataaggctac

3481 taacaatgcc atgcaagttg aatctgatga ttacatagct actaatggac cacttaaagt

3541 gggtggtagt tgtgttttaa gcggacacaa tcttgctaaa cactgtcttc atgttgtcgg

3601 cccaaatgtt aacaaaggtg aagacattca acttcttaag agtgcttatg aaaattttaa

3661 tcagcacgaa gttctacttg caccattatt atcagctggt atttttggtg ctgaccctat

3721 acattcttta agagtttgtg tagatactgt tcgcacaaat gtctacttag ctgtctttga

3781 taaaaatctc tatgacaaac ttgtttcaag ctttttggaa atgaagagtg aaaagcaagt

3841 tgaacaaaag atcgctgaga ttcctaaaga ggaagttaag ccatttataa ctgaaagtaa

3901 accttcagtt gaacagagaa aacaagatga taagaaaatc aaagcttgtg ttgaagaagt

3961 tacaacaact ctggaagaaa ctaagttcct cacagaaaac ttgttacttt atattgacat

4021 taatggcaat cttcatccag attctgccac tcttgttagt gacattgaca tcactttctt

4081 aaagaaagat gctccatata tagtgggtga tgttgttcaa gagggtgttt taactgctgt

4141 ggttatacct actaaaaagg ctggtggcac tactgaaatg ctagcgaaag ctttgagaaa

4201 agtgccaaca gacaattata taaccactta cccgggtcag ggtttaaatg gttacactgt

4261 agaggaggca aagacagtgc ttaaaaagtg taaaagtgcc ttttacattc taccatctat

4321 tatctctaat gagaagcaag aaattcttgg aactgtttct tggaatttgc gagaaatgct

4381 tgcacatgca gaagaaacac gcaaattaat gcctgtctgt gtggaaacta aagccatagt

4441 ttcaactata cagcgtaaat ataagggtat taaaatacaa gagggtgtgg ttgattatgg

4501 tgctagattt tacttttaca ccagtaaaac aactgtagcg tcacttatca acacacttaa

4561 cgatctaaat gaaactcttg ttacaatgcc acttggctat gtaacacatg gcttaaattt

4621 ggaagaagct gctcggtata tgagatctct caaagtgcca gctacagttt ctgtttcttc

4681 acctgatgct gttacagcgt ataatggtta tcttacttct tcttctaaaa cacctgaaga

4741 acattttatt gaaaccatct cacttgctgg ttcctataaa gattggtcct attctggaca

4801 atctacacaa ctaggtatag aatttcttaa gagaggtgat aaaagtgtat attacactag

4861 taatcctacc acattccacc tagatggtga agttatcacc tttgacaatc ttaagacact

4921 tctttctttg agagaagtga ggactattaa ggtgtttaca acagtagaca acattaacct

4981 ccacacgcaa gttgtggaca tgtcaatgac atatggacaa cagtttggtc caacttattt

5041 ggatggagct gatgttacta aaataaaacc tcataattca catgaaggta aaacatttta

5101 tgttttacct aatgatgaca ctctacgtgt tgaggctttt gagtactacc acacaactga

5161 tcctagtttt ctgggtaggt acatgtcagc attaaatcac actaaaaagt ggaaataccc

5221 acaagttaat ggtttaactt ctattaaatg ggcagataac aactgttatc ttgccactgc

5281 attgttaaca ctccaacaaa tagagttgaa gtttaatcca cctgctctac aagatgctta

5341 ttacagagca agggctggtg aagctgctaa cttttgtgca cttatcttag cctactgtaa

5401 taagacagta ggtgagttag gtgatgttag agaaacaatg agttacttgt ttcaacatgc

5461 caatttagat tcttgcaaaa gagtcttgaa cgtggtgtgt aaaacttgtg gacaacagca

5521 gacaaccctt aagggtgtag aagctgttat gtacatgggc acactttctt atgaacaatt

5581 taagaaaggt gttcagatac cttgtacgtg tggtaaacaa gctacaaaat atctagtaca

5641 acaggagtca ccttttgtta tgatgtcagc accacctgct cagtatgaac ttaagcatgg

5701 tacatttact tgtgctagtg agtacactgg taattaccag tgtggtcact ataaacatat

5761 aacttctaaa gaaactttgt attgcataga cggtgcttta cttacaaagt cctcagaata

5821 caaaggtcct attacggatg ttttctacaa agaaaacagt tacacaacaa ccataaaacc

5881 agttacttat aaattggatg gtgttgtttg tacagaaatt gaccctaagt tggacaatta

5941 ttataagaaa gacaattctt atttcacaga gcaaccaatt gatcttgtac caaaccaacc

6001 atatccaaac gcaagcttcg ataattttaa gtttgtatgt gataatatca aatttgctga

6061 tgatttaaac cagttaactg gttataagaa acctgcttca agagagctta aagttacatt

6121 tttccctgac ttaaatggtg atgtggtggc tattgattat aaacactaca caccctcttt

6181 taagaaagga gctaaattgt tacataaacc tattgtttgg catgttaaca atgcaactaa

6241 taaagccacg tataaaccaa atacctggtg tatacgttgt ctttggagca caaaaccagt

6301 tgaaacatca aattcgtttg atgtactgaa gtcagaggac gcgcagggaa tggataatct

6361 tgcctgcgaa gatctaaaac cagtctctga agaagtagtg gaaaatccta ccatacagaa

6421 agacgttctt gagtgtaatg tgaaaactac cgaagttgta ggagacatta tacttaaacc

6481 agcaaataat agtttaaaaa ttacagaaga ggttggccac acagatctaa tggctgctta

6541 tgtagacaat tctagtctta ctattaagaa acctaatgaa ttatctagag tattaggttt

6601 gaaaaccctt gctactcatg gtttagctgc tgttaatagt gtcccttggg atactatagc

6661 taattatgct aagccttttc ttaacaaagt tgttagtaca actactaaca tagttacacg

6721 gtgtttaaac cgtgtttgta ctaattatat gccttatttc tttactttat tgctacaatt

6781 gtgtactttt actagaagta caaattctag aattaaagca tctatgccga ctactatagc

6841 aaagaatact gttaagagtg tcggtaaatt ttgtctagag gcttcattta attatttgaa

6901 gtcacctaat ttttctaaac tgataaatat tataatttgg tttttactat taagtgtttg

6961 cctaggttct ttaatctact caaccgctgc tttaggtgtt ttaatgtcta atttaggcat

7021 gccttcttac tgtactggtt acagagaagg ctatttgaac tctactaatg tcactattgc

7081 aacctactgt actggttcta taccttgtag tgtttgtctt agtggtttag attctttaga

7141 cacctatcct tctttagaaa ctatacaaat taccatttca tcttttaaat gggatttaac

7201 tgcttttggc ttagttgcag agtggttttt ggcatatatt cttttcacta ggtttttcta

7261 tgtacttgga ttggctgcaa tcatgcaatt gtttttcagc tattttgcag tacattttat

7321 tagtaattct tggcttatgt ggttaataat taatcttgta caaatggccc cgatttcagc

7381 tatggttaga atgtacatct tctttgcatc attttattat gtatggaaaa gttatgtgca

7441 tgttgtagac ggttgtaatt catcaacttg tatgatgtgt tacaaacgta atagagcaac

7501 aagagtcgaa tgtacaacta ttgttaatgg tgttagaagg tccttttatg tctatgctaa

7561 tggaggtaaa ggcttttgca aactacacaa ttggaattgt gttaattgtg atacattctg

7621 tgctggtagt acatttatta gtgatgaagt tgcgagagac ttgtcactac agtttaaaag

7681 accaataaat cctactgacc agtcttctta catcgttgat agtgttacag tgaagaatgg

7741 ttccatccat ctttactttg ataaagctgg tcaaaagact tatgaaagac attctctctc

7801 tcattttgtt aacttagaca acctgagagc taataacact aaaggttcat tgcctattaa

7861 tgttatagtt tttgatggta aatcaaaatg tgaagaatca tctgcaaaat cagcgtctgt

7921 ttactacagt cagcttatgt gtcaacctat actgttacta gatcaggcat tagtgtctga

7981 tgttggtgat agtgcggaag ttgcagttaa aatgtttgat gcttacgtta atacgttttc

8041 atcaactttt aacgtaccaa tggaaaaact caaaacacta gttgcaactg cagaagctga

8101 acttgcaaag aatgtgtcct tagacaatgt cttatctact tttatttcag cagctcggca

8161 agggtttgtt gattcagatg tagaaactaa agatgttgtt gaatgtctta aattgtcaca

8221 tcaatctgac atagaagtta ctggcgatag ttgtaataac tatatgctca cctataacaa

8281 agttgaaaac atgacacccc gtgaccttgg tgcttgtatt gactgtagtg cgcgtcatat

8341 taatgcgcag gtagcaaaaa gtcacaacat tgctttgata tggaacgtta aagatttcat

8401 gtcattgtct gaacaactac gaaaacaaat acgtagtgct gctaaaaaga ataacttacc

8461 ttttaagttg acatgtgcaa ctactagaca agttgttaat gttgtaacaa caaagatagc

8521 acttaagggt ggtaaaattg ttaataattg gttgaagcag ttaattaaag ttacacttgt

8581 gttccttttt gttgctgcta ttttctattt aataacacct gttcatgtca tgtctaaaca

8641 tactgacttt tcaagtgaaa tcataggata caaggctatt gatggtggtg tcactcgtga

8701 catagcatct acagatactt gttttgctaa caaacatgct gattttgaca catggtttag

8761 ccagcgtggt ggtagttata ctaatgacaa agcttgccca ttgattgctg cagtcataac

8821 aagagaagtg ggttttgtcg tgcctggttt gcctggcacg atattacgca caactaatgg

8881 tgactttttg catttcttac ctagagtttt tagtgcagtt ggtaacatct gttacacacc

8941 atcaaaactt atagagtaca ctgactttgc aacatcagct tgtgttttgg ctgctgaatg

9001 tacaattttt aaagatgctt ctggtaagcc agtaccatat tgttatgata ccaatgtact

9061 agaaggttct gttgcttatg aaagtttacg ccctgacaca cgttatgtgc tcatggatgg

9121 ctctattatt caatttccta acacctacct tgaaggttct gttagagtgg taacaacttt

9181 tgactctgag tactgtaggc acggcacttg tgaaagatca gaagctggtg tttgtgtatc

9241 tactagtggt agatgggtac ttaacaatga ttattacaga tctttaccag gagttttctg

9301 tggtgtagat gctgtaaatt tacttactaa tatgtttaca ccactaattc aacctattgg

9361 tgctttggac atatcagcat ctatagtagc tggtggtatt gtagctatcg tagtaacatg

9421 ccttgcctac tattttatga ggtttagaag agcttttggt gaatacagtc atgtagttgc

9481 ctttaatact ttactattcc ttatgtcatt cactgtactc tgtttaacac cagtttactc

9541 attcttacct ggtgtttatt ctgttattta cttgtacttg acattttatc ttactaatga

9601 tgtttctttt ttagcacata ttcagtggat tgttatgttc acacctttag tacctttctg

9661 gataacaatt gcttatatca tttgtatttc cacaaagcat ttctattggt tctttagtaa

9721 ttacctaaag agacgtgtag tctttaatgg tgtttccttt agtacttttg aagaagctgc

9781 gctgtgcacc tttttgttaa ataaagaaat gtatctaaag ttgcgtagtg atgtgctatt

9841 acctcttacg caatataata gatacttagc tctttataat aagtacaagt attttagtgg

9901 agcaatggat acaactagct acagagaagc tgcttgttgt catctcgcaa aggctctcaa

9961 tgacttcagt aactcaggtt ctgatgttct ttaccaacca ccacaaacct ctatcacctc

10021 agctgttttg cagagtggtt ttagaaaaat ggcattccca tctggtaaag ttgagggttg

10081 tatggtacaa gtaacttgtg gtacaactac acttaacggt ctttggcttg atgacgtagt

10141 ttactgtcca agacatgtga tctgcacctc tgaagacatg cttaacccta attatgaaga

10201 tttactcatt cgtaagtcta atcataattt cttggtacag gctggtaatg ttcaactcag

10261 ggttattgga cattctatgc aaaattgtgt acttaagctt aaggttgata cagccaatcc

10321 taagacacct aagtataagt ttgttcgcat tcaaccagga cagacttttt cagtgttagc

10381 ttgttacaat ggttcaccat ctggtgttta ccaatgtgct atgaggccca atttcactat

10441 taagggttca ttccttaatg gttcatgtgg tagtgttggt tttaacatag attatgactg

10501 tgtctctttt tgttacatgc accatatgga attaccaact ggagttcatg ctggcacaga

10561 cttagaaggt aacttttatg gaccttttgt tgacaggcaa acagcacaag cagctggtac

10621 ggacacaact attacagtta atgttttagc ttggttgtac gctgctgtta taaatggaga

10681 caggtggttt ctcaatcgat ttaccacaac tcttaatgac tttaaccttg tggctatgaa

10741 gtacaattat gaacctctaa cacaagacca tgttgacata ctaggacctc tttctgctca

10801 aactggaatt gccgttttag atatgtgtgc ttcattaaaa gaattactgc aaaatggtat

10861 gaatggacgt accatattgg gtagtgcttt attagaagat gaatttacac cttttgatgt

10921 tgttagacaa tgctcaggtg ttactttcca aagtgcagtg aaaagaacaa tcaagggtac

10981 acaccactgg ttgttactca caattttgac ttcactttta gttttagtcc agagtactca

11041 atggtctttg ttcttttttt tgtatgaaaa tgccttttta ccttttgcta tgggtattat

11101 tgctatgtct gcttttgcaa tgatgtttgt caaacataag catgcatttc tctgtttgtt

11161 tttgttacct tctcttgcca ctgtagctta ttttaatatg gtctatatgc ctgctagttg

11221 ggtgatgcgt attatgacat ggttggatat ggttgatact agtttgtctg gttttaagct

11281 aaaagactgt gttatgtatg catcagctgt agtgttacta atccttatga cagcaagaac

11341 tgtgtatgat gatggtgcta ggagagtgtg gacacttatg aatgtcttga cactcgttta

11401 taaagtttat tatggtaatg ctttagatca agccatttcc atgtgggctc ttataatctc

11461 tgttacttct aactactcag gtgtagttac aactgtcatg tttttggcca gaggtattgt

11521 ttttatgtgt gttgagtatt gccctatttt cttcataact ggtaatacac ttcagtgtat

11581 aatgctagtt tattgtttct taggctattt ttgtacttgt tactttggcc tcttttgttt

11641 actcaaccgc tactttagac tgactcttgg tgtttatgat tacttagttt ctacacagga

11701 gtttagatat atgaattcac agggactact cccacccaag aatagcatag atgccttcaa

11761 actcaacatt aaattgttgg gtgttggtgg caaaccttgt atcaaagtag ccactgtaca

11821 gtctaaaatg tcagatgtaa agtgcacatc agtagtctta ctctcagttt tgcaacaact

11881 cagagtagaa tcatcatcta aattgtgggc tcaatgtgtc cagttacaca atgacattct

11941 cttagctaaa gatactactg aagcctttga aaaaatggtt tcactacttt ctgttttgct

12001 ttccatgcag ggtgctgtag acataaacaa gctttgtgaa gaaatgctgg acaacagggc

12061 aaccttacaa gctatagcct cagagtttag ttcccttcca tcatatgcag cttttgctac

12121 tgctcaagaa gcttatgagc aggctgttgc taatggtgat tctgaagttg ttcttaaaaa

12181 gttgaagaag tctttgaatg tggctaaatc tgaatttgac cgtgatgcag ccatgcaacg

12241 taagttggaa aagatggctg atcaagctat gacccaaatg tataaacagg ctagatctga

12301 ggacaagagg gcaaaagtta ctagtgctat gcagacaatg cttttcacta tgcttagaaa

12361 gttggataat gatgcactca acaacattat caacaatgca agagatggtt gtgttccctt

12421 gaacataata cctcttacaa cagcagccaa actaatggtt gtcataccag actataacac

12481 atataaaaat acgtgtgatg gtacaacatt tacttatgca tcagcattgt gggaaatcca

12541 acaggttgta gatgcagata gtaaaattgt tcaacttagt gaaattagta tggacaattc

12601 acctaattta gcatggcctc ttattgtaac agctttaagg gccaattctg ctgtcaaatt

12661 acagaataat gagcttagtc ctgttgcact acgacagatg tcttgtgctg ccggtactac

12721 acaaactgct tgcactgatg acaatgcgtt agcttactac aacacaacaa agggaggtag

12781 gtttgtactt gcactgttat ccgatttaca ggatttgaaa tgggctagat tccctaagag

12841 tgatggaact ggtactatct atacagaact ggaaccacct tgtaggtttg ttacagacac

12901 acctaaaggt cctaaagtga agtatttata ctttattaaa ggattaaaca acctaaatag

12961 aggtatggta cttggtagtt tagctgccac agtacgtcta caagctggta atgcaacaga

13021 agtgcctgcc aattcaactg tattatcttt ctgtgctttt gctgtagatg ctgctaaagc

13081 ttacaaagat tatctagcta gtgggggaca accaatcact aattgtgtta agatgttgtg

13141 tacacacact ggtactggtc aggcaataac agttacaccg gaagccaata tggatcaaga

13201 atcctttggt ggtgcatcgt gttgtctgta ctgccgttgc cacatagatc atccaaatcc

13261 taaaggattt tgtgacttaa aaggtaagta tgtacaaata cctacaactt gtgctaatga

13321 ccctgtgggt tttacactta aaaacacagt ctgtaccgtc tgcggtatgt ggaaaggtta

13381 tggctgtagt tgtgatcaac tccgcgaacc catgcttcag tcagctgatg cacaatcgtt

13441 tttaaacggg tttgcggtgt aagtgcagcc cgtcttacac cgttcggcac aggcactagt

13501 actgatgtcg tatacagggc ttttgacatc tacaatgata aagtagctgg ttttgctaaa

13561 ttcctaaaaa ctaattgttg tcgcttccaa gaaaaggacg aagatgacaa tttaattgat

13621 tcttactttg tagttaagag acacactttc tctaactacc aacatgaaga aacaatttat

13681 aatttactta aggattgtcc agctgttgct aaacatgact tctttaagtt tagaatagac

13741 ggtgacatgg taccacatat atcacgtcaa cgtcttacta aatacacaat ggcagacctc

13801 gtctatgctt taaggcattt tgatgaaggt aattgtgaca cattaaaaga aatacttgtc

13861 acatacaatt gttgtgatga tgattatttc aataaaaagg actggtatga ttttgtagaa

13921 aacccagata tattacgcgt atacgccaac ttaggtgaac gtgtacgcca agctttgtta

13981 aaaacagtac aattctgtga tgccatgcga aatgctggta ttgttggtgt actgacatta

14041 gataatcaag atctcaatgg taactggtat gatttcggtg atttcataca aaccacgcca

14101 ggtagtggag ttcctgttgt agattcttat tattcattgt taatgcctat attaaccttg

14161 accagggctt taactgcaga gtcacatgtt gacactgact taacaaagcc ttacattaag

14221 tgggatttgt taaaatatga cttcacggaa gagaggttaa aactctttga ccgttatttt

14281 aaatattggg atcagacata ccacccaaat tgtgttaact gtttggatga cagatgcatt

14341 ctgcattgtg caaactttaa tgttttattc tctacagtgt tcccacttac aagttttgga

14401 ccactagtga gaaaaatatt tgttgatggt gttccatttg tagtttcaac tggataccac

14461 ttcagagagc taggtgttgt acataatcag gatgtaaact tacatagctc tagacttagt

14521 tttaaggaat tacttgtgta tgctgctgac cctgctatgc acgctgcttc tggtaatcta

14581 ttactagata aacgcactac gtgcttttca gtagctgcac ttactaacaa tgttgctttt

14641 caaactgtca aacccggtaa ttttaacaaa gacttctatg actttgctgt gtctaagggt

14701 ttctttaagg aaggaagttc tgttgaatta aaacacttct tctttgctca ggatggtaat

14761 gctgctatca gcgattatga ctactatcgt tataatctac caacaatgtg tgatatcaga

14821 caactactat ttgtagttga agttgttgat aagtactttg attgttacga tggtggctgt

14881 attaatgcta accaagtcat cgtcaacaac ctagacaaat cagctggttt tccatttaat

14941 aaatggggta aggctagact ttattatgat tcaatgagtt atgaggatca agatgcactt

15001 ttcgcatata caaaacgtaa tgtcatccct actataactc aaatgaatct taagtatgcc

15061 attagtgcaa agaatagagc tcgcaccgta gctggtgtct ctatctgtag tactatgacc

15121 aatagacagt ttcatcaaaa attattgaaa tcaatagccg ccactagagg agctactgta

15181 gtaattggaa caagcaaatt ctatggtggt tggcacaaca tgttaaaaac tgtttatagt

15241 gatgtagaaa accctcacct tatgggttgg gattatccta aatgtgatag agccatgcct

15301 aacatgctta gaattatggc ctcacttgtt cttgctcgca aacatacaac gtgttgtagc

15361 ttgtcacacc gtttctatag attagctaat gagtgtgctc aagtattgag tgaaatggtc

15421 atgtgtggcg gttcactata tgttaaacca ggtggaacct catcaggaga tgccacaact

15481 gcttatgcta atagtgtttt taacatttgt caagctgtca cggccaatgt taatgcactt

15541 ttatctactg atggtaacaa aattgccgat aagtatgtcc gcaatttaca acacagactt

15601 tatgagtgtc tctatagaaa tagagatgtt gacacagact ttgtgaatga gttttacgca

15661 tatttgcgta aacatttctc aatgatgata ctctctgacg atgctgttgt gtgtttcaat

15721 agcacttatg catctcaagg tctagtggct agcataaaga actttaagtc agttctttat

15781 tatcaaaaca atgtttttat gtctgaagca aaatgttgga ctgagactga ccttactaaa

15841 ggacctcatg aattttgctc tcaacataca atgctagtta aacagggtga tgattatgtg

15901 taccttcctt acccagatcc atcaagaatc ctaggggccg gctgttttgt agatgatatc

15961 gtaaaaacag atggtacact tatgattgaa cggttcgtgt ctttagctat agatgcttac

16021 ccacttacta aacatcctaa tcaggagtat gctgatgtct ttcatttgta cttacaatac

16081 ataagaaagc tacatgatga gttaacagga cacatgttag acatgtattc tgttatgctt

16141 actaatgata acacttcaag gtattgggaa cctgagtttt atgaggctat gtacacaccg

16201 catacagtct tacaggctgt tggggcttgt gttctttgca attcacagac ttcattaaga

16261 tgtggtgctt gcatacgtag accattctta tgttgtaaat gctgttacga ccatgtcata

16321 tcaacatcac ataaattagt cttgtctgtt aatccgtatg tttgcaatgc tccaggttgt

16381 gatgtcacag atgtgactca actttactta ggaggtatga gctattattg taaatcacat

16441 aaaccaccca ttagttttcc attgtgtgct aatggacaag tttttggttt atataaaaat

16501 acatgtgttg gtagcgataa tgttactgac tttaatgcaa ttgcaacatg tgactggaca

16561 aatgctggtg attacatttt agctaacacc tgtactgaaa gactcaagct ttttgcagca

16621 gaaacgctca aagctactga ggagacattt aaactgtctt atggtattgc tactgtacgt

16681 gaagtgctgt ctgacagaga attacatctt tcatgggaag ttggtaaacc tagaccacca

16741 cttaaccgaa attatgtctt tactggttat cgtgtaacta aaaacagtaa agtacaaata

16801 ggagagtaca cctttgaaaa aggtgactat ggtgatgctg ttgtttaccg aggtacaaca

16861 acttacaaat taaatgttgg tgattatttt gtgctgacat cacatacagt aatgccatta

16921 agtgcaccta cactagtgcc acaagagcac tatgttagaa ttactggctt atacccaaca

16981 ctcaatatct cagatgagtt ttctagcaat gttgcaaatt atcaaaaggt tggtatgcaa

17041 aagtattcta cactccaggg accacctggt actggtaaga gtcattttgc tattggccta

17101 gctctctact acccttctgc tcgcatagtg tatacagctt gctctcatgc cgctgttgat

17161 gcactatgtg agaaggcatt aaaatatttg cctatagata aatgtagtag aattatacct

17221 gcacgtgctc gtgtagagtg ttttgataaa ttcaaagtga attcaacatt agaacagtat

17281 gtcttttgta ctgtaaatgc attgcctgag acgacagcag atatagttgt ctttgatgaa

17341 atttcaatgg ccacaaatta tgatttgagt gttgtcaatg ccagattacg tgctaagcac

17401 tatgtgtaca ttggcgaccc tgctcaatta cctgcaccac gcacattgct aactaagggc

17461 acactagaac cagaatattt caattcagtg tgtagactta tgaaaactat aggtccagac

17521 atgttcctcg gaacttgtcg gcgttgtcct gctgaaattg ttgacactgt gagtgctttg

17581 gtttatgata ataagcttaa agcacataaa gacaaatcag ctcaatgctt taaaatgttt

17641 tataagggtg ttatcacgca tgatgtttca tctgcaatta acaggccaca aataggcgtg

17701 gtaagagaat tccttacacg taaccctgct tggagaaaag ctgtctttat ttcaccttat

17761 aattcacaga atgctgtagc ctcaaagatt ttgggactac caactcaaac tgttgattca

17821 tcacagggct cagaatatga ctatgtcata ttcactcaaa ccactgaaac agctcactct

17881 tgtaatgtaa acagatttaa tgttgctatt accagagcaa aagtaggcat actttgcata

17941 atgtctgata gagaccttta tgacaagttg caatttacaa gtcttgaaat tccacgtagg

18001 aatgtggcaa ctttacaagc tgaaaatgta acaggactct ttaaagattg tagtaaggta

18061 atcactgggt tacatcctac acaggcacct acacacctca gtgttgacac taaattcaaa

18121 actgaaggtt tatgtgttga catacctggc atacctaagg acatgaccta tagaagactc

18181 atctctatga tgggttttaa aatgaattat caagttaatg gttaccctaa catgtttatc

18241 acccgcgaag aagctataag acatgtacgt gcatggattg gcttcgatgt cgaggggtgt

18301 catgctacta gagaagctgt tggtaccaat ttacctttac agctaggttt ttctacaggt

18361 gttaacctag ttgctgtacc tacaggttat gttgatacac ctaataatac agatttttcc

18421 agagttagtg ctaaaccacc gcctggagat caatttaaac acctcatacc acttatgtac

18481 aaaggacttc cttggaatgt agtgcgtata aagattgtac aaatgttaag tgacacactt

18541 aaaaatctct ctgacagagt cgtatttgtc ttatgggcac atggctttga gttgacatct

18601 atgaagtatt ttgtgaaaat aggacctgag cgcacctgtt gtctatgtga tagacgtgcc

18661 acatgctttt ccactgcttc agacacttat gcctgttggc atcattctat tggatttgat

18721 tacgtctata atccgtttat gattgatgtt caacaatggg gttttacagg taacctacaa

18781 agcaaccatg atctgtattg tcaagtccat ggtaatgcac atgtagctag ttgtgatgca

18841 atcatgacta ggtgtctagc tgtccacgag tgctttgtta agcgtgttga ctggactatt

18901 gaatatccta taattggtga tgaactgaag attaatgcgg cttgtagaaa ggttcaacac

18961 atggttgtta aagctgcatt attagcagac aaattcccag ttcttcacga cattggtaac

19021 cctaaagcta ttaagtgtgt acctcaagct gatgtagaat ggaagttcta tgatgcacag

19081 ccttgtagtg acaaagctta taaaatagaa gaattattct attcttatgc cacacattct

19141 gacaaattca cagatggtgt atgcctattt tggaattgca atgtcgatag atatcctgct

19201 aattccattg tttgtagatt tgacactaga gtgctatcta accttaactt gcctggttgt

19261 gatggtggca gtttgtatgt aaataaacat gcattccaca caccagcttt tgataaaagt

19321 gcttttgtta atttaaaaca attaccattt ttctattact ctgacagtcc atgtgagtct

19381 catggaaaac aagtagtgtc agatatagat tatgtaccac taaagtctgc tacgtgtata

19441 acacgttgca atttaggtgg tgctgtctgt agacatcatg ctaatgagta cagattgtat

19501 ctcgatgctt ataacatgat gatctcagct ggctttagct tgtgggttta caaacaattt

19561 gatacttata acctctggaa cacttttaca agacttcaga gtttagaaaa tgtggctttt

19621 aatgttgtaa ataagggaca ctttgatgga caacagggtg aagtaccagt ttctatcatt

19681 aataacactg tttacacaaa agttgatggt gttgatgtag aattgtttga aaataaaaca

19741 acattacctg ttaatgtagc atttgagctt tgggctaagc gcaacattaa accagtacca

19801 gaggtgaaaa tactcaataa tttgggtgtg gacattgctg ctaatactgt gatctgggac

19861 tacaaaagag atgctccagc acatatatct actattggtg tttgttctat gactgacata

19921 gccaagaaac caactgaaac gatttgtgca ccactcactg tcttttttga tggtagagtt

19981 gatggtcaag tagacttatt tagaaatgcc cgtaatggtg ttcttattac agaaggtagt

20041 gttaaaggtt tacaaccatc tgtaggtccc aaacaagcta gtcttaatgg agtcacatta

20101 attggagaag ccgtaaaaac acagttcaat tattataaga aagttgatgg tgttgtccaa

20161 caattacctg aaacttactt tactcagagt agaaatttac aagaatttaa acccaggagt

20221 caaatggaaa ttgatttctt agaattagct atggatgaat tcattgaacg gtataaatta

20281 gaaggctatg ccttcgaaca tatcgtttat ggagatttta gtcatagtca gttaggtggt

20341 ttacatctac tgattggact agctaaacgt tttaaggaat caccttttga attagaagat

20401 tttattccta tggacagtac agttaaaaac tatttcataa cagatgcgca aacaggttca

20461 tctaagtgtg tgtgttctgt tattgattta ttacttgatg attttgttga aataataaaa

20521 tcccaagatt tatctgtagt ttctaaggtt gtcaaagtga ctattgacta tacagaaatt

20581 tcatttatgc tttggtgtaa agatggccat gtagaaacat tttacccaaa attacaatct

20641 agtcaagcgt ggcaaccggg tgttgctatg cctaatcttt acaaaatgca aagaatgcta

20701 ttagaaaagt gtgaccttca aaattatggt gatagtgcaa cattacctaa aggcataatg

20761 atgaatgtcg caaaatatac tcaactgtgt caatatttaa acacattaac attagctgta

20821 ccctataata tgagagttat acattttggt gctggttctg ataaaggagt tgcaccaggt

20881 acagctgttt taagacagtg gttgcctacg ggtacgctgc ttgtcgattc agatcttaat

20941 gactttgtct ctgatgcaga ttcaactttg attggtgatt gtgcaactgt acatacagct

21001 aataaatggg atctcattat tagtgatatg tacgacccta agactaaaaa tgttacaaaa

21061 gaaaatgact ctaaagaggg ttttttcact tacatttgtg ggtttataca acaaaagcta

21121 gctcttggag gttccgtggc tataaagata acagaacatt cttggaatgc tgatctttat

21181 aagctcatgg gacacttcgc atggtggaca gcctttgtta ctaatgtgaa tgcgtcatca

21241 tctgaagcat ttttaattgg atgtaattat cttggcaaac cacgcgaaca aatagatggt

21301 tatgtcatgc atgcaaatta catattttgg aggaatacaa atccaattca gttgtcttcc

21361 tattctttat ttgacatgag taaatttccc cttaaattaa ggggtactgc tgttatgtct

21421 ttaaaagaag gtcaaatcaa tgatatgatt ttatctcttc ttagtaaagg tagacttata

21481 attagagaaa acaacagagt tgttatttct agtgatgttc ttgttaacaa ctaaacgaac

21541 aatgtttgtt tttcttgttt tattgccact agtctctagt cagtgtgtta atcttacaac

21601 cagaactcaa ttaccccctg catacactaa ttctttcaca cgtggtgttt attaccctga

21661 caaagttttc agatcctcag ttttacattc aactcaggac ttgttcttac ctttcttttc

21721 caatgttact tggttccatg ctatacatgt ctctgggacc aatggtacta agaggtttga

21781 taaccctgtc ctaccattta atgatggtgt ttattttgct tccactgaga agtctaacat

21841 aataagaggc tggatttttg gtactacttt agattcgaag acccagtccc tacttattgt

21901 taataacgct actaatgttg ttattaaagt ctgtgaattt caattttgta atgatccatt

21961 tttgggtgtt tattaccata aaaacaacaa aagttggatg gaaagtgagt tcagagttta

22021 ttctagtgcg aataattgca cttttgaata tgtctctcag ccttttctta tggaccttga

22081 aggaaaacag ggtaatttca aaaatcttag ggaatttgtg tttaagaata ttgatggtta

22141 ttttaaaata tattctaagc acacgcctat taatttagtg cgtgatctcc ctcagggttt

22201 ttcggcttta gaaccattgg tagatttgcc aataggtatt aacatcacta ggtttcaaac

22261 tttacttgct ttacatagaa gttatttgac tcctggtgat tcttcttcag gttggacagc

22321 tggtgctgca gcttattatg tgggttatct tcaacctagg acttttctat taaaatataa

22381 tgaaaatgga accattacag atgctgtaga ctgtgcactt gaccctctct cagaaacaaa

22441 gtgtacgttg aaatccttca ctgtagaaaa aggaatctat caaacttcta actttagagt

22501 ccaaccaaca gaatctattg ttagatttcc taatattaca aacttgtgcc cttttggtga

22561 agtttttaac gccaccagat ttgcatctgt ttatgcttgg aacaggaaga gaatcagcaa

22621 ctgtgttgct gattattctg tcctatataa ttccgcatca ttttccactt ttaagtgtta

22681 tggagtgtct cctactaaat taaatgatct ctgctttact aatgtctatg cagattcatt

22741 tgtaattaga ggtgatgaag tcagacaaat cgctccaggg caaactggaa agattgctga

22801 ttataattat aaattaccag atgattttac aggctgcgtt atagcttgga attctaacaa

22861 tcttgattct aaggttggtg gtaattataa ttacctgtat agattgttta ggaagtctaa

22921 tctcaaacct tttgagagag atatttcaac tgaaatctat caggccggta gcacaccttg

22981 taatggtgtt gaaggtttta attgttactt tcctttacaa tcatatggtt tccaacccac

23041 taatggtgtt ggttaccaac catacagagt agtagtactt tcttttgaac ttctacatgc

23101 accagcaact gtttgtggac ctaaaaagtc tactaatttg gttaaaaaca aatgtgtcaa

23161 tttcaacttc aatggtttaa caggcacagg tgttcttact gagtctaaca aaaagtttct

23221 gcctttccaa caatttggca gagacattgc tgacactact gatgctgtcc gtgatccaca

23281 gacacttgag attcttgaca ttacaccatg ttcttttggt ggtgtcagtg ttataacacc

23341 aggaacaaat acttctaacc aggttgctgt tctttatcag ggtgttaact gcacagaagt

23401 ccctgttgct attcatgcag atcaacttac tcctacttgg cgtgtttatt ctacaggttc

23461 taatgttttt caaacacgtg caggctgttt aataggggct gaacatgtca acaactcata

23521 tgagtgtgac atacccattg gtgcaggtat atgcgctagt tatcagactc agactaattc

23581 tcctcggcgg gcacgtagtg tagctagtca atccatcatt gcctacacta tgtcacttgg

23641 tgcagaaaat tcagttgctt actctaataa ctctattgcc atacccacaa attttactat

23701 tagtgttacc acagaaattc taccagtgtc tatgaccaag acatcagtag attgtacaat

23761 gtacatttgt ggtgattcaa ctgaatgcag caatcttttg ttgcaatatg gcagtttttg

23821 tacacaatta aaccgtgctt taactggaat agctgttgaa caagacaaaa acacccaaga

23881 agtttttgca caagtcaaac aaatttacaa aacaccacca attaaagatt ttggtggttt

23941 taatttttca caaatattac cagatccatc aaaaccaagc aagaggtcat ttattgaaga

24001 tctacttttc aacaaagtga cacttgcaga tgctggcttc atcaaacaat atggtgattg

24061 ccttggtgat attgctgcta gagacctcat ttgtgcacaa aagtttaacg gccttactgt

24121 tttgccacct ttgctcacag atgaaatgat tgctcaatac acttctgcac tgttagcggg

24181 tacaatcact tctggttgga cctttggtgc aggtgctgca ttacaaatac catttgctat

24241 gcaaatggct tataggttta atggtattgg agttacacag aatgttctct atgagaacca

24301 aaaattgatt gccaaccaat ttaatagtgc tattggcaaa attcaagact cactttcttc

24361 cacagcaagt gcacttggaa aacttcaaga tgtggtcaac caaaatgcac aagctttaaa

24421 cacgcttgtt aaacaactta gctccaattt tggtgcaatt tcaagtgttt taaatgatat

24481 cctttcacgt cttgacaaag ttgaggctga agtgcaaatt gataggttga tcacaggcag

24541 acttcaaagt ttgcagacat atgtgactca acaattaatt agagctgcag aaatcagagc

24601 ttctgctaat cttgctgcta ctaaaatgtc agagtgtgta cttggacaat caaaaagagt

24661 tgatttttgt ggaaagggct atcatcttat gtccttccct cagtcagcac ctcatggtgt

24721 agtcttcttg catgtgactt atgtccctgc acaagaaaag aacttcacaa ctgctcctgc

24781 catttgtcat gatggaaaag cacactttcc tcgtgaaggt gtctttgttt caaatggcac

24841 acactggttt gtaacacaaa ggaattttta tgaaccacaa atcattacta cagacaacac

24901 atttgtgtct ggtaactgtg atgttgtaat aggaattgtc aacaacacag tttatgatcc

24961 tttgcaacct gaattagact cattcaagga ggagttagat aaatatttta agaatcatac

25021 atcaccatat gttgatttag gtgacatctc tggcattaat gcttcagttg taaacattca

25081 aaaagaaatt gaccgcctca atgaggttgc caagaattta aatgaatctc tcatcgatct

25141 ccaagaactt ggaaagtatg agcagtatat aaaatggcca tggtacattt ggctaggttt

25201 tatagctggc ttgattgcca tagtaatggt gacaattatg ctttgctgta tgaccagttg

25261 ctgtagttgt ctcaagggct gttgttcttg tggatcctgc tgcaaatttg atgaagacga

25321 ctctgagcca gtgctcaaag gagtcaaatt acattacaca taaacgaact tatggatttg

25381 tttatgagaa tcttcacaat tggaactgta actttgaagc aaggtgaaat caaggatgct

25441 actccttcag attttgttcg cgctactgca acgataccga tacaagcctc actccctttc

25501 ggatggctta ttgttggcgt tgcacttctt gctgtttttc agagcgcttc caaaatcata

25561 accctcaaaa agagatggca actagcactc tccaagggtg ttcactttgt ttgcaacttg

25621 ctgttgttgt ttgtaacagt ttactcacac cttttgctcg ttgctgctgg ccttgaagcc

25681 ccttttctct atctttatgc tttagtctac ttcttgcaga gtataaactt tgtaagaata

25741 ataatgaggc tttggctttg ctggaaatgc cgttccaaaa acccattact ttatgatgcc

25801 aactattttc tttgctggca tactaattgt tacgactatt gtatacctta caatagtgta

25861 acttcttcaa ttgtcattac ttcaggtgat ggcacaacaa gtcctatttc tgaacatgac

25921 taccagattg gtggttatac tgaaaaatgg gaatctggag taaaagactg tgttgtatta

25981 cacagttact tcacttcaga ctattaccag ctgtactcaa ctcaattgag tacagacact

26041 ggtgttgaac atgttacctt cttcatctac aataaaattg ttgatgagcc tgaagaacat

26101 gtccaaattc acacaatcga cggttcatcc ggagttgtta atccagtaat ggaaccaatt

26161 tatgatgaac cgacgacgac tactagcgtg cctttgtaag cacaagctga tgagtacgaa

26221 cttatgtact cattcgtttc ggaagagaca ggtacgttaa tagttaatag cgtacttctt

26281 tttcttgctt tcgtggtatt cttgctagtt acactagcca tccttactgc gcttcgattg

26341 tgtgcgtact gctgcaatat tgttaacgtg agtcttgtaa aaccttcttt ttacgtttac

26401 tctcgtgtta aaaatctgaa ttcttctaga gttcctgatc ttctggtcta aacgaactaa

26461 atattatatt agtttttctg tttggaactt taattttagc catggcagat tccaacggta

26521 ctattaccgt tgaagagctt aaaaagctcc ttgaacaatg gaacctagta ataggtttcc

26581 tattccttac atggatttgt cttctacaat ttgcctatgc caacaggaat aggtttttgt

26641 atataattaa gttaattttc ctctggctgt tatggccagt aactttagct tgttttgtgc

26701 ttgctgctgt ttacagaata aattggatca ccggtggaat tgctatcgca atggcttgtc

26761 ttgtaggctt gatgtggctc agctacttca ttgcttcttt cagactgttt gcgcgtacgc

26821 gttccatgtg gtcattcaat ccagaaacta acattcttct caacgtgcca ctccatggca

26881 ctattctgac cagaccgctt ctagaaagtg aactcgtaat cggagctgtg atccttcgtg

26941 gacatcttcg tattgctgga caccatctag gacgctgtga catcaaggac ctgcctaaag

27001 aaatcactgt tgctacatca cgaacgcttt cttattacaa attgggagct tcgcagcgtg

27061 tagcaggtga ctcaggtttt gctgcataca gtcgctacag gattggcaac tataaattaa

27121 acacagacca ttccagtagc agtgacaata ttgctttgct tgtacagtaa gtgacaacag

27181 atgtttcatc tcgttgactt tcaggttact atagcagaga tattactaat tattatgagg

27241 acttttaaag tttccatttg gaatcttgat tacatcataa acctcataat taaaaattta

27301 tctaagtcac taactgagaa taaatattct caattagatg aagagcaacc aatggagatt

27361 gattaaacga acatgaaaat tattcttttc ttggcactga taacactcgc tacttgtgag

27421 ctttatcact accaagagtg tgttagaggt acaacagtac ttttaaaaga accttgctct

27481 tctggaacat acgagggcaa ttcaccattt catcctctag ctgataacaa atttgcactg

27541 acttgcttta gcactcaatt tgcttttgct tgtcctgacg gcgtaaaaca cgtctatcag

27601 ttacgtgcca gatcagtttc acctaaactg ttcatcagac aagaggaagt tcaagaactt

27661 tactctccaa tttttcttat tgttgcggca atagtgttta taacactttg cttcacactc

27721 aaaagaaaga cagaatgatt gaactttcat taattgactt ctatttgtgc tttttagcct

27781 ttctgctatt ccttgtttta attatgctta ttatcttttg gttctcactt gaactgcaag

27841 atcataatga aacttgtcac gcctaaacga acatgaaatt tcttgttttc ttaggaatca

27901 tcacaactgt agctgcattt caccaagaat gtagtttaca gtcatgtact caacatcaac

27961 catatgtagt tgatgacccg tgtcctattc acttctattc taaatggtat attagagtag

28021 gagctagaaa atcagcacct ttaattgaat tgtgcgtgga tgaggctggt tctaaatcac

28081 ccattcagta catcgatatc ggtaattata cagtttcctg tttacctttt acaattaatt

28141 gccaggaacc taaattgggt agtcttgtag tgcgttgttc gttctatgaa gactttttag

28201 agtatcatga cgttcgtgtt gttttagatt tcatctaaac gaacaaacta aaatgtctga

28261 taatggaccc caaaatcagc gaaatgcacc ccgcattacg tttggtggac cctcagattc

28321 aactggcagt aaccagaatg gagaacgcag tggggcgcga tcaaaacaac gtcggcccca

28381 aggtttaccc aataatactg cgtcttggtt caccgctctc actcaacatg gcaaggaaga

28441 ccttaaattc cctcgaggac aaggcgttcc aattaacacc aatagcagtc cagatgacca

28501 aattggctac taccgaagag ctaccagacg aattcgtggt ggtgacggta aaatgaaaga

28561 tctcagtcca agatggtatt tctactacct aggaactggg ccagaagctg gacttcccta

28621 tggtgctaac aaagacggca tcatatgggt tgcaactgag ggagccttga atacaccaaa

28681 agatcacatt ggcacccgca atcctgctaa caatgctgca atcgtgctac aacttcctca

28741 aggaacaaca ttgccaaaag gcttctacgc agaagggagc agaggcggca gtcaagcctc

28801 ttctcgttcc tcatcacgta gtcgcaacag ttcaagaaat tcaactccag gcagcagtaa

28861 acgaacttct cctgctagaa tggctggcaa tggcggtgat gctgctcttg ctttgctgct

28921 gcttgacaga ttgaaccagc ttgagagcaa aatgtctggt aaaggccaac aacaacaagg

28981 ccaaactgtc actaagaaat ctgctgctga ggcttctaag aagcctcggc aaaaacgtac

29041 tgccactaaa gcatacaatg taacacaagc tttcggcaga cgtggtccag aacaaaccca

29101 aggaaatttt ggggaccagg aactaatcag acaaggaact gattacaaac attggccgca

29161 aattgcacaa tttgccccca gcgcttcagc gttcttcgga atgtcgcgca ttggcatgga

29221 agtcacacct tcgggaacgt ggttgaccta cacaggtgcc atcaaattgg atgacaaaga

29281 tccaaatttc aaagatcaag tcattttgct gaataagcat attgacgcat acaaaacatt

29341 cccaccaaca gagcctaaaa aggacaaaaa gaagaaggct gatgaaactc aagccttacc

29401 gcagagacag aagaaacagc aaactgtgac tcttcttcct gctgcagatt tggatgattt

29461 ctccaaacaa ttgcaacaat ccatgagcag tgctgactca actcaggcct aaactcatgc

29521 agaccacaca aggcagatgg gctatataaa cgttttcgct tttccgttta cgatatatag

29581 tctactcttg tgcagaatga attctcgtaa ctacatagca caagtagatg tagttaactt

29641 taatctcaca tagcaatctt taatcagtgt gtaacattag ggaggacttg aaagagccac

29701 cacattttca ccgaggccac gcggagtacg atcgagtgta cagtgaacaa tgctagggag

29761 agctgcctat atggaagagc cctaatgtgt aaaattaatt ttagtagtgc tatcccca

29821 agaatgaca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa

29881 aa

4. Последовательность S-белка коронавируса c подобранными праймерами

1 atgtttgttt ttcttgtttt attgccacta gtctctagtc agtgtgttaa tcttacaacc

61 agaactcaat taccccctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac

121 aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc

181 aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat

241 aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata

301 ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt

361 aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt

421 ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat

481 tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa

541 ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat

601 tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt

661 tcggctttagaaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact

721 ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct

781 ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat

841 gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag

901 tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc

961 caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa

1021 gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac

1081 tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat

1141 ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt

1201 gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc gctccagggc aaactggaaa gattgctgat

1261 tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat

1321 cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat

1381 ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt

1441 aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact

1501 aatggtgttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca

1561 ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat

1621 ttcaacttca atggtttaac aggcacaggt gttcttactg agtctaacaa aaagtttctg

1681 cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag

1741 acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca

1801 ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg atgttaactg cacagaagtc

1861 cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct

1921 aatgtttttc aaacacgtgc aggctgttta ataggggctg aacatgtcaa caactcatat

1981 gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct

2041 cctcggcggg cacgtagtgt agctagtcaa tccatcattg cctacactat gtcacttggt

2101 gcagaaaatt cagttgctta ctctaataac tctattgcca tacccacaaa ttttactatt

2161 agtgttacca cagaaattct accagtgtct atgaccaaga catcagtaga ttgtacaatg

2221 tacatttgtg gtgattcaac tgaatgcagc aatcttttgt tgcaatatgg cagtttttgt

2281 acacaattaa accgtgcttt aactggaata gctgttgaac aagacaaaaa cacccaagaa

2341 gtttttgcac aagtcaaaca aatttacaaa acaccaccaa ttaaagattt tggtggtttt

2401 aatttttcac aaatattacc agatccatca aaaccaagca agaggtcatt tattgaagat

2461 ctacttttca acaaagtgac acttgcagat gctggcttca tcaaacaata tggtgattgc

2521 cttggtgata ttgctgctag agacctcatt tgtgcacaaa agtttaacgg ccttactgtt

2581 ttgccacctt tgctcacaga tgaaatgatt gctcaataca cttctgcact gttagcgggt

2641 acaatcactt ctggttggac ctttggtgca ggtgctgcat tacaaatacc atttgctatg

2701 caaatggctt ataggtttaa tggtattgga gttacacaga atgttctcta tgagaaccaa

2761 aaattgattg ccaaccaatt taatagtgct attggcaaaa ttcaagactc actttcttcc

2821 acagcaagtg cacttggaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac

2881 acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc

2941 ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga

3001 cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgcaga aatcagagct

3061 tctgctaatc ttgctgctac taaaatgtca gagtgtgtac ttggacaatc aaaaagagtt

3121 gatttttgtg gaaagggcta tcatcttatg tccttccctc agtcagcacc tcatggtgta

3181 gtcttcttgc atgtgactta tgtccctgca caagaaaaga acttcacaac tgctcctgcc

3241 atttgtcatg atggaaaagc acactttcct cgtgaaggtg tctttgtttc aaatggcaca

3301 cactggtttg taacacaaag gaatttttat gaaccacaaa tcattactac agacaacaca

3361 tttgtgtctg gtaactgtga tgttgtaata ggaattgtca acaacacagt ttatgatcct

3421 ttgcaacctg aattagactc attcaaggag gagttagata aatattttaa gaatcataca

3481 tcaccagatg ttgatttagg tgacatctct ggcattaatg cttcagttgt aaacattcaa

3541 aaagaaattg accgcctcaa tgaggttgcc aagaatttaa atgaatctct catcgatctc

3601 caagaacttg gaaagtatga gcagtatata aaatggccat ggtacatttg gctaggtttt

3661 atagctggct tgattgccat agtaatggtg acaattatgc tttgctgtat gaccagttgc

3721 tgtagttgtc tcaagggctg ttgttcttgt ggatcctgct gcaaatttga tgaagacgac

3781 tctgagccag tgctcaaagg agtcaaatta cattacacat aa

Желтым указаны последовательности, комплементарные праймерам, зеленым – получаемая последовательность