XII Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся
Старт в науке
ПРИМЕНЕНИЕ ЭНДОФИТНЫХ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ РАСТЕНИЙ САЛАТА В УСЛОВИЯХ КОСМОСА
Автор работы награжден дипломом победителя II степени
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
Введение
В настоящее время с помощью пилотируемой космонавтики успешно осваивается околоземное космическое пространство (1) и разрабатывается программа по подготовке полета человека на дальние расстояния в космосе. Планируется экспедиция на Марс (ближайший длительный перелет запланирован в 2030-ом году), возможно, даже его колонизация (2;3;4). На МКС постоянно проживают космонавты разных стран, и вопрос их пропитания всегда решается с Земли. Доставка 1 кг еды обходится примерно в 5-6 тысяч долларов США. И если сегодня еда регулярно доставляется на МКС партиями, причем, объем перевозок ограничен, то в случае с долгими экспедициями такая возможность вовсе исключается. Поэтому весьма актуальной является проблема, связанная с самостоятельным обеспечением космонавтов пищей и источниками кислорода на борту в период длительных экспедиций. Решением данной проблемы может стать выращивание растений и производство еды в космосе (4). И как показали результаты проведенных ранее экспериментов выращивание растений в условиях космоса возможно. В частности, NASA провело два успешных эксперимента по выращиванию еды (на примере салата) на МКС с помощью специальной системы выращивания растений – Veggie (6,7), так же проводились и другие исследования. Однако в настоящее время выращивание растений в космосе требует большого количества затрат (энергии, воды, места) и к тому же продуктивность растений значительно ниже, чем при их выращивании на Земле. Поэтому, полноценное обеспечение космонавтов пищей, выращенной на борту, пока не представляется возможным. И хоть эксперименты связанные с выращиванием растений в космосе проводятся все чаще, ученые со всего мира работают над тем, чтобы выращивать в космосе столько пищи, чтобы ее хватало для 100% пропитания космонавтов. Сегодня нельзя говорить даже об 1%, но через какое-то время нас ждут долгие экспедиции и колонизации планет (4). В связи с этим, пристальное внимание уделяется исследованиям, направленным, как на выявление фундаментальных механизмов роста и адаптации растений к условиям космоса, так и корректировке и подбору методов и условий, позволяющих растениям максимально увеличить продуктивность с меньшими затратами (6;8;9).
Одним из методов для повышения адаптационных свойств растений к новым условиям произрастания и повышения продуктивности может явиться использование непатогенных бактерий стимулирующих рост растений Bacillus subtilis. Так как известно, что увеличение продуктивности растений, произрастающих на нашей планете, и повышение их устойчивости к разным стресс-факторам окружающей среды (болезни, засуха, тяжелые металлы, засоление, UF излучения и др.) возможно за счет использования этих микроорганизмов (10; 11;12;13;14;15).
Вместе с тем, вызывает интерес исследование возможности применения эндофитных Bacillus subtilis как безопасной и низкозатратной технологии для повышения продуктивности растений и их биологической ценности при выращивании пищевых растений в условиях космоса.
Содержание работы
1.2. Особенности выращивания растений в условиях космоса
Идея выращивать растения в космосе принадлежит Константину Циолковскому. Задолго до начала пилотируемых полетов он заявил, что зеленая флора в будущем станет главным источником питания и поддержания состава атмосферы на космических кораблях. Известно, что на растения в космическом пространстве действует ряд факторов, отсутствующих в земных условиях. Один из них - невесомость. Вот почему ученые задумывались над ними еще до того, как был осуществлен полет человека в космос. В лабораторных условиях невесомость имитируется вращением горизонтально расположенных растений вокруг своей продольной оси с помощью особого прибора - клиностата, который исключает одностороннее действие гравитационного поля. Растение, вращаемое на клиностате, все время испытывает влияние земного притяжения, но не с одной стороны, а с разных. Вследствие этого оно растет горизонтально, тогда, как без вращения корень изгибается вниз, а стебель - вверх. В опытах литовских исследователей вращение клиностата осуществлялось со скоростью один оборот за 21 секунду. Установлено, что «невесомость» подобного рода не сказалась на прорастании семян, однако в дальнейшем растения заметно отставали в развитии от экземпляров, находившихся в стационарных условиях или вращаемых вокруг вертикальной оси. Хотя внешние признаки отклонения от нормы отсутствовали, однако 35-40% опытных растений арабидопсиса (Arabidopsisthaliana) и мари красной (Chenopódium rúbrum) начинали быстро желтеть (16;17).
Осуществление космических полетов позволило проводить опыты по влиянию невесомости в космическом пространстве. Первые исследования о влиянии условий космического полета на растения были проведены еще в 1960 г. на космическом корабле, на борту которого вместе с собаками Белкой и Стрелкой были семена некоторых сельскохозяйственных и декоративных растений, водоросль хлорелла и зеленые веточки традесканции виргинской (17).
Первый эксперимент по выращиванию растений непосредственно для еды стал возможным благодаря системе Veggie, которая была доставлена на МКС в апреле 2014 г. (6). Эксперимент стал частью большого проекта NASA под названием «Veg-1» по изучению роста растений в космосе, а также по обеспечению запасов еды на космических станциях и кораблях, в том числе для полетов за пределы земной орбиты. Листья салата росли в течение 33 дней перед тем, как космонавты их собрали. Первый урожай был отправлен на Землю для дальнейших лабораторных исследований. После сбора второго урожая (также выращивались 33 дня) астронавты Скотт Келли, Кьелл Линдгрен и Юи Кимия впервые попробовали листья красного салата-латука, выращенные на орбите в условиях микрогравитации (20).
Эксперименты прошли успешно и показали, что салат, выращенный в космосе, по своим питательным свойствам ничем не отличается от земного. Скорость его роста и прочие показатели – также соответствует земным. Но данный эксперимент показал, что выращивание еды в космосе при нынешнем уровне технологий – это нерациональное занятие. В результате, сегодня проще и выгоднее доставить еду с Земли. Но первые шаги были сделаны, и получены важные данные. Например, что для выращивания растений зеленого цвета необходимы специальные лампы. А главное, был получен ответ на самый волнующий вопрос – да, в космосе действительно можно выращивать пищу (20).
Ближайший длительный перелет запланирован в 2030 г. экспедицией NASA на Марс. Предполагается, что перелет будет проходить от 150 до 300 дней, и в этом полете людям понадобится источник пищи, производимой на борту. В связи с тем, что свободного места на космическомкорабле практически нет, ученым предстоит найти оптимальное решение для обеспечения условий произрастания сельскохозяйственных культур. Эксперименты по выращиванию еды в космосе не просто продолжаются, но и становятся все более и более частыми. Сегодня экспериментами с растениями в России занимается Институт медико-биологических проблем и все экипажи МКС. Способность производить в космосе еду для космонавтов позволит снизить зависимость от Земли и откроет новые горизонты для космических экспедиций. В связи с этим, пристальное внимание уделяется исследованиям, направленным, как на выявление фундаментальных механизмов роста растений в условиях космоса, так и корректировке и подбору условий, позволяющих максимально увеличить продуктивность растений в условиях космоса с меньшими затратами энергии (4). Решение данных проблем имеет большое практическое значение, и новые данные в этой области заслуживают самого пристального внимания.
1.2. Применение рост-стимулирующих эндофитных бактерий
Bacillus subtilis для повышения продуктивности растений
Стимулирующие рост растений бактерии (СРРБ) Bacillus subtilis – непатогенные спорообразующие бактерии ускоряющие рост и повышающие их иммунитет к широкому спектру болезней (10;11;21) и устойчивость к насекомым-вредителям и абиотическим стрессам (засуха, засоление, тяжелые металлы, УФ-излучения и др.) (14;22). К примеру, рост-стимулирующий и защитный эффект Bacillussubtilis был показан для многих растений, включая пшеницу, ячмень, огурец, кабачок, табак, сахарную свеклу, томат, перец, землянику, салат и мн. др. (10;11;13;15;23;24).
Рис. 1. Клетки Bacillussubtilis (25)
Bacillus subtilis хорошо растут на разных питательных средах (Рис.1). Размер клеток 0,7..0,8 х 2..3 мкм. При температурах, близких к 0°C, большая часть бацилл образует споры, отличающиеся высокой устойчивостью к внешним факторам. При наступлении благоприятных условий бактерии переходят в активное (вегетативное) состояние и начинают работать – защищать почву и растения от болезней и абиотических стрессов (26). Зарегистрированные бациллярные биопрепараты (к примеру на основе штаммов 26D, В-10 ВИЗР, ИПМ 215 и М-22 ВИЗР) разрешены к применению в сельском и личном подсобных хозяйствах против болезней картофеля (ризоктониоз, фитофтороз, фузариоз), цветочных и овощных культур открытого и/или защищенного грунта (корневые гнили, пятнистости, фитофтороз, альтернариоз, черная ножка, бактериоз), плодово-ягодных культур, зерновых, сахарной свеклы, винограда и др. (27). Ряд штаммов Bacillus subtilis используют для получения фармацевтических препаратов и пищевых добавок. Например, на основе Bacillus subtilis создан препарат Споробактерин для борьбы с нарушениями микрофлоры кишечника (28).
Пристальный интерес вызывают эндофитные бактерии Bacillussubtilis, которые внедрившись однажды в ткани растения, могут способствовать формированию их долговременной защиты от неблагоприятных факторов окружающей среды в течение всей вегетации и в послеуборочный период при хранении (12;15;30;31).
|
А |
Б |
В |
Г |
|
(I) (II) |
|||
Рис. 2. Способность бактерий Bacillussubtilis стимулировать рост (Б) и оказывать защитный эффект (Г) на растения в условиях заражения фитопатогеном (I) (29) и воздействия засухи (II) (32)
Действие Bacillus subtilis связывают с синтезом биологически активных веществ (антибактериальные и инсектицидные компоненты, сидерофоры и хелаторы, гормоны и ферменты), способностью снижать уровень этилена в растениях, фиксировать азот, улучшать доступность макро-/микроэлементов (10;12) и запускать механизмы системной устойчивости по всему растению-хозяину (11;14;33).
Интерес вызывает исследование возможности использования эндофитных бактерий Bacillus subtilis как экологически безопасной и низко-затратной технологии для повышения продуктивности растений при их выращивании в условиях космоса.
Таким образом, запланированные в настоящем проекте исследования лежат в русле современных мировых тенденций, и вопрос о влиянии эндофитных бактерий Bacillus subtilis на рост, продуктивность и биологическую ценность растений салата латука в условиях космоса можно отнести к числу впервые поставленных. Реализация данного проекта расширит знания, как о фундаментальных механизмах взаимодействия бактерий-эндофитов Bacillussubtilis с растениями в условиях космоса, так и внесет вклад во внедрение экологически безопасных и низко-затратных технологий выращивания и повышения продуктивности пищевых растений в условиях космоса.
2. Цель и задачи исследования
Цель работы заключается в исследовании влияния эндофитных бактерий Bacillus subtilis на рост, развитие и биологическую ценность растений салата-латука (Lettuce) в условиях космоса.
Задачи исследования:
1) оценить влияние предпосевной обработки семян салата-латука бактериями Bacillussubtilis 26D на всхожесть семян салата при выращивании в условиях космоса в сравнении с контрольными необработанными растениями;
2) оценить влияние Bacillussubtilis 26D на содержание фотосинтетических пигментов хлорофилла а, хлорофилла в и каротиноидов (как важных компонентов фотосинтеза, ответственных за формирование продуктивности) в листьях салата в условиях космоса;
3) проанализировать влияние Bacillussubtilis 26D на рост и продуктивность растений салата (длина растений, накопление сырой и сухой масса) в условиях космоса;
4) проанализировать влияние Bacillussubtilis 26D на содержание микроэлементов, тяжелых металлов и витаминов в листьях салата в условиях космоса;
5) провести оценку влиянияBacillussubtilis 26D пищевую и энергетическую ценность листьев салата-латука, выращенных в условиях космоса.
3. Материалы и методы проведения исследований
Для того чтобы оценить возможность использования эндофитных бактерий Bacillus subtilis для ускорения роста, повышения продуктивности и биологической ценности растений салата в условиях космоса важно проанализировать характер их влияния на показатели роста растений, параметры фотосинтеза, содержание микроэлементов и витаминов, а также пищевую и энергетическую ценность в сравнении с необработанными (контрольными) растениями в условиях космоса.Эти же варианты предполагается выращивать в лабораторных условиях на Земле (наземный контроль).
Работу предполагается проводить на семенах и растениях салата-латука посевного (Lettuce, раннеспелый сортМосковский парниковый), обработанных перед посевом Bacillussubtilis26D. Инокуляцию растений предполагается проводить суспензионной культурой штамма Bacillus subtilis 26D (108 КОЕ/мл) (основа коммерческого биопрепарата Фитоспорин-М, производитель ООО НВП БашИнком, Уфа, Россия) или воде (контроль) путем замачивания семян в течение 30 минут в лабораторных условиях (на Земле) до отправки семян в космос. Затем, обработанные семена упаковываются в специальные герметичные пакеты для отправки на орбиту. (Рис.3).
Рис. 3. Схема эксперимента
Для оценки сходства и различия роста растений, необработанных (контроль) и обработанных Bacillus subtilis 26D, выращенных в условиях космоса и в лабораторных условиях на Земле (наземный контроль) планируется применение современных и классических физиолого-биохимических методов:
- оценка всхожести семян (34);
- анализ интенсивности ростовых процессов (измерение длины, сырой и сухой масса) растений (34).
- определение фотосинтетических пигментов (хлорофилл а, хлорофилл b, каротиноиды) (35);
- определение микроэлементов и тяжелых металлов (As, Pb, Cd, Sn, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni) атомно-абсорбционным методом (36);
- определение витаминов А, Д2, Д3, E, С, B1, B2, B3, B6, PP методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (37;38);
- расчет энергетической и пищевой ценности согласно ГОСТ 33985-2016 (39).
Все опыты планируется проводить в трех биологических и пяти аналитических повторах с приведением в иллюстрациях средних арифметически значений и ошибки средних.
4. Ожидаемые результаты научного исследования и их научная и практическая значимость
К настоящему времени, исследования проведенные в лабораторных условиях (наземный контроль) позволили обнаружить, что предпосевная обработка Bacillussubtilis 26D увеличивала всхожесть семян салата-латука (на 130% в сравнении с необработанными контрольными семенами) (Рис. 4), рост растений (Рис. 5) и накопление их сырой и сухой биомассы (Рис. 6).
Рис. 4. Влияние предпосевной обработки Bacillus subtilis 26D на всхожесть семян салата в лабораторных условиях на Земле (наземный контроль)
Рис. 5. Влияние Bacillus subtilis 26D на внешний вид и рост растений салата в лабораторных условиях на Земле (наземный контроль)
Рис. 6. Влияние Bacillus subtilis 26D на накопление сырой и сухой биомассы растений салата в лабораторных условиях на Земле (наземный контроль)
В результате проведения исследований на орбите:
1) Будут получены приоритетные данные о влиянии предпосевной обработки семян салата бактериями Bacillus subtilis 26D на всхожесть семян салата в условиях космоса;
2) Будет впервые выявлено влияние Bacillus subtilis 26D на содержание фотосинтетических пигментов (хлорофилла а, хлорофилла b и каротиноидов) – как важных компонентов формирования продуктивности растений, в листьях салата в условиях космоса;
3) Будет выявлено влияние Bacillus subtilis 26D на рост (длина, сырая и сухая биомасса) растений салата при выращивании на орбите;
4) Будут получены приоритетные данные о влиянии Bacillus subtilis 26D на содержание микроэлементов и тяжелых металлов (As, Pb, Cd, Sn, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni), а также витаминов (А, Д2, Д3, E, С, B1, B2, B3, B6, PP) в листьях салата в условиях космоса;
5) Будет выявлено влияние Bacillus subtilis 26D на пищевую и энергетическую ценность листьев салата-латука, выращенных в условиях космоса.
Совокупность полученных в ходе выполнения проекта результатов позволит выявить особенности физиологического влияния эндофитных бактерий Bacillus subtilis на рост растений салата в условиях космоса и позволит оценить эффективность использования данных бактерий для повышения продуктивности растений и их биологической ценности не только на Земле, но и при их выращивании в условиях космоса. Полученные данные будут нести научную и практическую ценность, а также расширят знания в области выращивания растений в космосе.
Список литературы
Ефанов В.В., Хартов В.В. Пятьдесят лет космической деятельности НПО имени С.А. Лавочкина // К.Э. Циолковский и этапы развития космонавтики: материалы 50-х научных чтений памяти К.Э. Циолковского / Отв. за выпуск Н.А. Абакулова, Г.А. Сергеева, Л.Н. Канукова. 2015. С. 27-31.
Пилотируемая экспедиция на Марс / Под ред. А.С. Коротеева. – М.: Российская академия космонавтики им. К.Э. Циолковского. 2006. 320 с.
И.А. Соболев. Проблемы проектов планетных экспедиций и стратегия космической экспансии // Пилотируемые полеты в космос. 2016. № 2(19). С.113-125.
Сайт «Еда-космонавтов». [Электронный ресурс]. http://xn----7sbbiahg7bskjbd0bu.xn--p1ai/blog/post/kosmiceskoe-pitanie-budusego-vyrasivanie-edy-v-kosmose
Левинских М.А., Сигналова О.Б., Дерендяева Т.А., Ливанская О.Г., Нефедова Е.Л., Сычев В.Н., Подольский И.Г.Разработка технологии выращивания и выбор овощных листовых культур для космических оранжерей // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2001. Т. 35. № 1. С. 61-67.
Официальный сайт «NASA». [Электронный ресурс]. https://www.nasa.gov/mission_pages/station/research/experiments/383.html
Сайт «emosurf». [Электронный ресурс]. http://emosurf.com/post/1793
Ferl R.J., Wheeler R., Levine H.G., Paul A.-L. Plants in space // Curr Opin Plant Biol. 2002. 5:258-263.
Kiss J.Z. Conducting Plant Experiments in Space. In: Blancaflor E. (eds) Plant Gravitropism. Methods in Molecular Biology. 2015. V. 1309. Humana Press, New York, NY.
Berg G. Plant-microbe interactions promoting plant growth and health: perspectives for controlled use of microorganisms in agriculture // Appl Microbiol. Biotechnol. 2009. 84(1):11-18.
Burkhanova G.F., Veselova S.V., Sorokan’ A.V., Blagova D.K., Nuzhnaya T.V., Maksimov I.V. Strains of Bacillus ssp. regulate wheat resistance to Septoria nodorum Berk // Applied Biochem and Microbiol. 2017. 53(3):346-352.
Pandey P.K., Singh M.C., Singh A.K., Kumar M., Pathak M., Shakywar R.C., Pandey A.K. Inside the Plants: Endophytic Bacteria and their Functional Attributes for Plant Growth Promotion // Int. J. Curr. Microbiol. App. Sci. 2017. 6(2):11-21.
Esitken A., Yildiz H.E., Ercisli S., Donmez M.F., Turan M., Gunes A.. Effect of plant growth promoting bacteria (PGPB) on yield, growth and nutrient content of organically grown strawberry // Scientia Holticulturae. 2010. 124:62-66.
Sayed S.A., Atef A.S., Soha E. Response of three sweet basil cultivars to inoculation with Bacillus subtilis and arbuscular mycorrhizal fungi under salt stress conditions // Nature and Science. 2011. 9(6):31-36.
Пусенкова Л.И., Ильясова Е.Ю., Максимов И.В., Ласточкина О.В. Повышение адаптивного потенциала посевов сахарной свеклы микробными биопрепаратами в условиях биотических и абиотических стрессов // Сельскохозяйственная биология. 2015. 50(1):115-123.
Сайт «Человек и космос». [Электронный ресурс]. http://www.cosmonautics.ru/3-3.html
Сайт «Clubbrain». [Электронный ресурс]. http://clubbrain.ru/referatu-botanika/rasteniya-v-kosmose/
Kiss J.Z., Millar K.D.L., Edelmann R.E. Phototropism of Arabidopsis thaliana in microgravity and fractional gravity on the International Space Station // Planta. 2012. 236:635-645.
Сайт «Биомолекула». [Электронный ресурс]. https://biomolecula.ru/articles/rasteniia-v-kosmose-instruktsiia-po-primeneniiu
Сайт «Cameralabs». [Электронный ресурс]. https://cameralabs.org/9023-astronavty-vpervye-pitayutsya-ovoshchami-kotorye-vyrosli-v-kosmose
Beneduzi A., Ambrosini A., Passaglia L. Plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR): Their potential as antagonists and biocontrol agents // Genetics and Molecular Biology. 2012. 35(4). 1044-1051.
Dimkpa C.O., Merten D., Svatos A., Büchel G., Kothe E. Siderophores mediate reduced and increased uptake of cadmium by Streptomyces tendae F4 and sunflower (Helianthus annuus), respectively // Journal of Applied Microbiology. 2009. 107:1687-1696.
Egamberdieva D., Kucharova Z., Davranov K., Berg G., Makarova N., Azarova T. Bacteria able to control foot and root rot and to promote growth of cucumber in salinated soils // Biol. Fertil. Soils. 2011. 47:197-205.
Kalfor M.S., Aliniaeifard S., Self M., Javadi E.,m Bernard F., Li T., Lastochkina O. Rhisobacteria Вacillus subtilis reduces toxic effects of high electrical conductivity in soilless culture of lettuce // НortScience. 2017. In press.
Сайт«Organicsoiltechnology». [Электронный ресурс]. http://organicsoiltechnology.com/bacillus-subtilis-bio-control.html
Штерншис М.В., Джалилов Ф.С.-У., Андреева И.В., Томилова О.Г. Биологическая защита растений / Под ред. М.В. Штерншис. - М.: КолосС, 2004. - [4] л. ил.: ил. - 264 с. - (Учебники и учеб. пособия).
Березина Н.В. Биологические препараты «Алирин-Б» и «Гамаир» в борьбе с фитофторозом томата и картофеля. Биологические препараты. Сельское хозяйство. Экология / ООО "ЭМ-Кооперация". – М., 2008. С. 246-248.
Хаитов Р.М. Аллергология и иммунология. Национальное руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 636 с.
Сайт «University of Delaware». [Электронный ресурс]. http://www1.udel.edu/udaily/2013/sep/soil-bacteria-092112.html
Sessitsch A., Hardoim P., Döring J., Weilharter A., Krause A., Woyke T., Mitter B., Hauberg-Lotte L., Friedrich F., Rahalkar M., Hurek T., Sarkar A., Bodrossy L., van Overbeek L., Brar D., van Elsas J.D., Reinhold-Hurek B. Functional Characteristics of an Endophyte Community Colonizing Rice Roots as Revealed by Metagenomic Analysis // MPMI. 2012. 25(1) 28-36.
Lastochkina, O.; Baymiev, A.; Shayahmetova, A.; Garshina, D.; Koryakov, I.; Shpirnaya, I.; Pusenkova, L.; Mardanshin, I.; Kasnak, C.; Palamutoglu, R. Effects of Endophytic Bacillus subtilis and salicylic acid on postharvest diseases (Phytophthora infestans, Fusarium oxysporum) development in stored potato tubers // Plants. 2020. 9:76.
Lastochkina O., Garshina D., Ivanov S., Yuldashev R., Khafizova R., Allagulova Ch., Fedorova K., Avalbaev A., Maslennikova D., Bosacchi M. Seed priming with endophytic Bacillus subtilis modulates physiological responses of two different Triticum aestivum L. cultivars under drought stress // Plants. 2020. 9(12):1810.
Van Loon L.C. Plant responses to plant growth-promoting rhizobacteria // Eur. J. Plant Pathol. 2007. 119:243-254.
Малый практикум по физиологии растений // Под ред. А.Т. Мокроносова. М.: МГУ. 1994. 184 c.
Jeffrey, S.; Humphrey, G. New spectrophotometric equations for determining chlorophylls a, b, c1 and c2 in higher plants, algae and natural phytoplankton. Biochem. Physiol. Pfl. 1975, 167, 191-194.
M-02-1009-08. Методика количественного химического анализа. Определение As, Pb, Cd, Sn, Cr, Cu, Fe, Mn и Ni в пробах пищевых продуктов и пищевого сырья атомно-абсорбционным методом с электротермической атомизацией. ООО Аналит, г. Санкт-Петербург, 2008 г.
М-02-1006-08. Биологически активные добавки, премиксы, корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методика выполнения измерений массовой доли жирорастворимых витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. ООО Аналит, Санкт-Петербург, 2008 г.
М-02-902-146-08. Методика выполнения измерений массовой доли водорастворимых витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. ООО Аналит, Санкт-Петербург, 2008 г.
ГОСТ 33985-2016. Салат-латук, эндивий кудрявый, эндивий эскариол свежие. Технические условия.