Микробиологический анализ воды в водоемах г. Волжского Волгоградской области

XIII Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся
Старт в науке

Микробиологический анализ воды в водоемах г. Волжского Волгоградской области

Маликов С.И. 1
1муниципальное общеобразовательное учреждение "Средняя школа № 23 имени 87 Гвардейской стрелковой дивизии г. Волжского Волгоградской области"
Маликова С.Ю. 1
1муниципальное общеобразовательное учреждение "Средняя школа № 23 имени 87 Гвардейской стрелковой дивизии г. Волжского Волгоградской области"
Автор работы награжден дипломом победителя II степени
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Введение

В нашей жизни вода занимает особо важное положение среди природных сфер Земли, однако ее качество в настоящее время не соответствуют нормативным требованиям, установленным самими же людьми. Поэтому на современном этапе развития человеческой цивилизации проблема количества и качества пресной воды приобретает глобальный характер.

Город Волжский Волгоградской области расположен на левом берегу реки Волги в Прикаспийской низменности. С северо-востока город граничит с большой степной зоной, в юго-восточном направлении простирается Волго-Ахтубинская пойма с многочисленными ериками и озерами.

Для проведения рекреационно-оздоровительных мероприятий используются берега реки Ахтубы и озера, расположенные на территории города.

Таким образом, летний период в г. Волжском характеризуется массовым посещением как санкционированных, так и несанкционированных пляжей. Сочетание высоких температур, большое скопление людей и близость городских коммуникаций способствует загрязнению водоемов. В связи с этим определение соответствия качества воды городских водных объектов допустимым значениям загрязняющих веществ по физическим, химическим, бактериологическим и органолептическим критериям является необходимым элементом санитарного мониторинга.

В Федеральном законе "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" сказано: «Водные объекты, используемые в целях питьевого и хозяйственно-бытового водоснабжения, а также в лечебных, оздоровительных и рекреационных целях, в том числе водные объекты, расположенные в границах городских и сельских населенных пунктов, не должны являться источниками биологических, химических и физических факторов вредного воздействия на человека» [1].

Соответствие качества воды санитарно-микробиологическим показателям чрезвычайно важно для сохранения здоровья жителей города.

В связи с этим целью нашего исследования являлся санитарно-микробиологический анализ воды водоемов г. Волжского.

Задачи:

Исследовать физико-химические свойства воды озера Круглое, реки Ахтубы на участке, не используемом в рекреационных целях, и городского пляжа.

Провести санитарно-микробиологический анализ воды поверхностных водных объектов г. Волжского.

Провести идентификацию выделенных морфологически и тинкториально характерных лактозоположительных оксидазоотрицательных колоний биохимическими методами.

Провести статистический анализ полученных результатов по показателям ОМЧ, БГКП, ОКБ.

Актуальность: изучение микробиологических показателей воды в водоемах, входящих в рекреационные зоны, является актуальным в связи необходимостью обеспечения благоприятных условий для пляжного отдыха и профилактики распространения инфекционных заболеваний среди населения.

Практическая значимость: состоит в том, что результаты исследования можно использовать для оценки качества воды в водоемах города Волжского.

Новизна: Определение характеристики водоемов рекреации г. Волжского: озера Круглого и реки Ахтубы (на городском пляже и в месте несанкционированного купания) по физико-химическим свойствам и санитарно-микробиологическим показателям (ОМЧ, БГКП, ОКБ). Проведена идентификация выделенных морфологически и тинкториально характерных лактозоположительных оксидазоотрицательных колоний биохимическими методами.

Глава 1. Санитарно-микробиологический анализ воды поверхностных

водных объектов

В реках, озерах и в других водоемах, а также в грунтовых водах содержится значительное число видов микроорганизмов. Совокупность разных типов микроорганизмов, населяющих водоем, называют микрофлорой.

1.1. Основные микробиологические показатели

Основные понятия в области качества вод установлены ГОСТ 27065-86 (СТ СЭВ 5184-85) «Качество вод» [6].

Качество воды характеризуют следующие санитарно-микробиологические показатели:

ОМЧ (общее микробное число) – общее количество микроорганизмов, находящихся в 1 мл пробы. Значение ОМЧ определяют в колониеобразующих единицах КОЕ. ОМЧ – показатель общей бактериальной обсемененности.

 Колониеобразующие единицы (КОЕ) – показатель, характеризующий микробиологическую «чистоту» или, напротив, степень бактериальной загрязненности. Оценивается по числу живых микроорганизмов, содержащихся в определенных объёмах исследуемых проб по проросшим единичным колониям на плотных питательных средах. [МУ 64-01-001-2002]

Колиморфные бактерии (бактерии группы кишечной палочки - БГКП) - условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий.

К бактериям группы кишечных палочек относят представителей родов Escherichia (в том числе и Е. coli), Citrobacter (типичный представитель C. colicitrovorum), Enterobacter (типичный представитель E. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Колиморфные бактерии различаются ферментативными свойствами и антигенной структурой.

Интенсивность фекального загрязнения воды характеризует показатель - индекс кишечной палочки (коли-индекс) — количество БГКП, обнаруженное в 1 л воды. Вода поверхностных источников хозяйственно-питьевого водоснабжения не должна содержать возбудителей кишечных заболеваний, а число БГКП должно быть не более 10 000 в 1 л воды.

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференцированных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре (37±1)° С течение 24-48 ч.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре (44±0,5)° С течение 24 ч.

ОКБ –нормируемый показатель при оценке качества воды водоемов в местах водозаборов для централизованного водоснабжения, рекреации, в черте населенных пунктов. ОКБ – интегральный показатель степени фекального загрязнения, который включает ТКБ, Е. coli, и поэтому обладает индикаторной надежностью в отношении возбудителей бактериальных кишечных инфекций.

Безопасность питьевой воды в эпидемическом отношении (СанПиН 2.1.4.1074-01) [4] определяется ее соответствием нормативам по микробиологическим и паразитологическим показателям, представленным в таблице 1.
     Обнаружение микробов – представителей нормальной микрофлоры организма служит показателем санитарного неблагополучия и потенциальной опасности исследуемых водных объектов. Поэтому такие микроорганизмы называются «санитарно-показательными» [9].

Рисунок 1. Санитарно-показательные микроорганизмы.

На рисунке 1 приведены санитарно-показательные микроорганизмы, обнаружение которых в пробах является свидетельством их загрязнения выделениями человека [7].

1.2. Определение санитарной характеристики водных экосистем

Степень загрязненности водоемов органическим остатками и наличие в них микроорганизмов соответствует определенным зонам сапробности[10].

Различают три зоны сапробности.

Олигосапробная зона – имеющая небольшое количество органических остатков и мало содержащая бактерий. Количество бактерий в этой зоне составляет от 10 до 1000 в 1 мл.

Мезосапробная зона представляет собой более загрязненную воду, где происходят процессы распада белков до аммиака и углеводов до углекислого газа и метана. В 1 мл насчитывают до 100000 бактерий.

Полисапробная зона – зона сильнейшего загрязнения, с резко выраженными процессами гнилостного, анаэробного распада органических остатков. Число бактерий в этой зоне доходит до 1000000 бактерий.

Для определения сапробности мы использовали КОЕ (колониеобразующая единица), - стандартный показатель, указывающий на число бактерий, образующих колонии в 1 мл среды.

Одним из необходимых показателей для характеристики санитарного благополучия водоема является коэффициент самоочищения [11].

Коэффициент самоочищения определяется по отношению сапрофитной микрофлоры к патогенной.

1.3. Идентификация— определение (установление) ви­довой принадлежности микроорганизма

Критерием для идентификации является наличие у микроба совокупности основных призна­ков, характерных для данного вида.

К основным видовым признакам бактерий относятся:

морфология микробной клетки;

тинкториальные свойства — особенности окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски;

культуральные признаки — особенности роста микроба на питательных средах;

биохимические признаки — наличие у бактерий фермен­тов, необходимых для синтеза или расщепления (фер­ментации) различных химических соединений.

Биохимическая идентификация. Для оценки биохимической активности бактерий используют следующие реакции: ферментацию, окисление, ассимиляцию, диссимиляцию, гидролиз субстрата.

Классический (традиционный) метод идентификации мик­робов по биохимическим признакам заключается в посеве чис­той культуры на дифференциально-диагностические среды, с целью оценки способ­ности микроорганизма ассимилировать данный субстрат или определения конечных продуктов его метаболизма. Исследова­ние занимает не менее 1 суток.

1.4. Основные представители микрофлоры водоемов

Вибрионы (Vibrio) — род бактерий семейства вибрионы (Vibrionaceae), порядок вибрионы (vibrionales), класс гамма-протеобактерии (γ-proteobacteria), тип протеобактерии (Proteobacteria).

Прямые или изогнутые палочки (0,4 ‒ 0,7 × 1,5 ‒ 2,3 мкм). По Граму представители рода окрашиваются отрицательно, большинство видов оксидаза-положительно.

Холерный вибрион (Vibrio cholerae), является возбудителем острого тяжелого инфекционного заболевания — холеры, которая характеризуется поражением желудочно-кишечного тракта с явлениями общей интоксикации и локализацией возбудителя в тонком кишечнике.

Эшерихии (Еscherichia) - род бактерий семейства энтеробактерии (Enterobacteriaceae), порядок энтеробактерии (Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (γ -proteobacteria), тип протеобактерии (Proteobacteria).

Грамотрицательные, споронеобразующие, анаэробные бактерии.

Псевдомонады (Pseudomonas) – род бактерий семейства псевдомонады (Pseudomonadaceae). Относится к группе грамотрицательных аэробных бактерий и имеет большое значение в патологии человека. Бактерии хорошо растут на простых питательных средах. Для выделения чистой культуры применяют селективные или дифференциально-диагностические питательные среды с добавлением антисептиков.

Стафилококки (Staphylococcus) – род бактерий семейства стафилококки.

К роду Staphylococcusотносится неподвижные грамположительные кокки, диаметр клетки которых составляет от 0,6 до 1,2 мкм.

Широко распространены в почве, воздухе, представители нормальной кожной микрофлоры человека и животных. Стафилококк может давать воспалительный процесс практически любой системы и любого органа – кожи и подкожной клетчатки, внутренних органов, нервной ткани, мозга и сердца.

Глава 2. Место и методы исследования

2.1. Характеристика водоемов рекреации г. Волжского

Для исследования микрофлоры были выбраны следующие водоемы, использующиеся людьми в рекреационных целях:

1) Озеро Круглое, координаты: с.ш., в.д.(Приложение 1).

Озеро Круглое стоячий водоем, расположенный на старом русле реки Ахтуба. Питается от нескольких родников. Площадь озера - 13,9 га. Водоем очень активно используется людьми в рекреационных целях для купания и рыбалки. Вода в озере мутная, зеленоватая, в толще воды много зеленых водорослей.

2) Река Ахтуба–не рекреационная зона, координаты: с.ш.,

в.д. (Приложение 2)

Левый рукав Волги, отделяющийся от нее напротив северной части Волгограда. Вода в реке проточная, длина Ахтубы - 537 км. Русло реки достигает в ширину 200-300 метров.Место, где осуществлялся сбор проб.

3) Река Ахтуба–Городской пляж города Волжского, координаты:

с.ш., в.д. (Приложение 3). Городской пляж на реке Ахтуба располагается в старой части города недалеко от садоводческого общества. Активно используется горожанами в рекреационных целях – для отдыха и купания.

Все пробы были собраны 22.07.2019, с 7:30 до 8:30 и сразу отвезены в лабораторию для анализа.

2.2. Отбор проб и транспортировка

Отбор проб был осуществлен в соответствии с требованиями МУК 4.2.2314-08[3]иГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб» [5].

Пробы собирались в отобранных для исследования водоемах. Конкретная точка сбора фиксировалась с помощью специального приложения – MyGPSCoordinates. Данные заносились в протокол исследования.

Сбор проб осуществлялся за два часа до поступления в лабораторию.

В ходе сбора проб были использованы стеклянные банки (500 мл) и герметичные резиновые крышки. Емкости для сбора проб были предварительно простерилизованы и плотно закупорены.

Пробы собирались в водоемах на расстоянии 3-5 м от берега на глубине не менее 1 метра. Герметично закрытую и стерилизованную емкость опускали под воду на глубину 15-20 см от поверхности и открывали. До поступления проб в лабораторию банки не открывались.

2.3. Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды

В работе использовались термостаты для температурного режима (37±1) °С и (44±1) °С; термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С с ценой деления шкалы 0,5 °С; рН-метр, обеспечивающий измерение с погрешностью до 0,01; лупа с двукратным увеличением; облучатель бактерицидный; оптический стандарт мутности на 10 ед.; спиртовка; петли бактериологические; пинцеты для работы с мембранными фильтрами; штативы для пробирок; фильтрующие материалы для микробиологических целей (мембранные фильтры, аналитические трековые мембраны и другие фильтрующие материалы с диаметром пор не более 0,45 мкм и размером диска 35 или 47 мм), разрешенные к применению в установленном порядке; индикаторы бумажные для определения рН в диапазоне 6-8 с интервалом определения 0,2-0,3; пипетки, вместимостью 1,5, 10 мл с ценой деления 0,1 мл многоразового или одноразового использования; пробирки (многоразового использования); чашки бактериологические (Петри); фломастеры по стеклу; перчатки резиновые; спирт этиловый ректификованный медицинский; физиологический раствор NaCl; питательные среды (среда Эндо, мясо-пептонный агар - МПА, селективная среда TCBS, щелочной агар, среда Олькеницкого, дифференциально-диагностические среды с углеводами - арабинозой, моннозой, сахарозой); СИБ для оксидазного теста; реактивы для окраски препаратов по Грамму.

2.4 Определение физико-химических свойств воды в изучаемых водоемах

По соответствующим методикам [8], [12] провели работу по определению физико-химических свойств.

В момент сбора проб в полевых условиях определяли параметры:

Температура воды измерялась в полевых условиях с помощью водного термометра (спиртового термометра в пластмассовом защитном кожухе). Первый отсчет по термометру снимали спустя 5-10 минут после его погружения в воду.

Определяли рН воды непосредственно в полевых условиях. Оценивали величину рН с помощью универсальной индикаторной бумаги.

Присутствие нефтепродуктов в воде обнаруживали в полевых условиях визуально по радужным пятнам и серым пленкам на поверхности воды.

Остальные параметры определялись в лабораторных условиях.

Прозрачность воды определяли в цилиндре из бесцветного стекла, визуально просматривая ее на свет. При визуальной оценке прозрачности природные воды характеризовали как прозрачные, слегка мутные, мутные и очень мутные.

Определение цвета воды проводили в камеральных условиях. Для этого воду наливали в тонкостенный стакан и ставили его на лист белой бумаги. Цвет определяли, просматривая воду сверху вниз.

Осадок в воде исследуемых водоемов определяли в прозрачном тонкостенном стакане спустя 1 час после взбалтывания пробы. Визуально отмечали состав, цвет осадка и его количество (ничтожный, незначительный, заметный, большой), а также характер осадка: кристаллический, илистый, песчаный, аморфный и т.п.

Для определения жесткости в емкость с образцом воды добавляли немного мыльного раствора и взбалтывали ее. Если вода жесткая, то пена почти не образуется, а в мягкой воде ее будет много.

2.5 Методика санитарно-микробиологического анализа воды.

Исследование проводили согласно методическим указаниям «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов» МУК 4.2.1884-04 [2].

Посев на среду МПА (мясо-пептонный агар).

Общее количество бактерий (ОМЧ) в воде определяли путем посева проб воды на мясо-пептонный агар в стерильных чашках Петри.

На поверхность среды помещали по три фильтра (по количеству проб) пинцетом, предварительно прокалив его над пламенем спиртовки.

Чашки с засеянными средами помещали в термостаты при 22°С (для учета сапрофитных микроорганизмов) и 37°С (для учета патогенных микроорганизмов) на 48ч.

Общее количество бактерий определяли в пересчете на число колоний, выросших при посеве 1 мл воды.

Посев на среду Эндо

Для определения количества БГКП использовали метод прямого посева — определенных разведений воды на среду Эндо.

На поверхность среды помещали по три фильтра (по количеству проб) пинцетом, предварительно прокалив его над пламенем спиртовки.

Чашки с засеянными средами помещали в термостаты при 37°С и 44°С на 48ч.

Посев на селективную среду и щелочной агар

Селективная среда служит для выявления в исследуемых пробах бактерий рода Vibrio. На щелочном агаре растут и бактерии кишечной группы.

Во всех 3 средах не обнаружено.

. Методика идентификации выделенных морфологически и тинкториально характерных лактозоположительных оксидазоотрицательных колоний биохимическими методами

Окраска мазков по Граму:

Метод позволяет все микроорганизмы разделить на две группы: грамположительные (гр+) и грамотрицательные (гр–).

При соблюдении технологииграмположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый.

Тест на оксидазу 1. Для выявления оксидазоположительных или оксидазоотрицательных бактерий из всех выросших колоний выбрали три колонии разных типов (темные, средние и светлые).

Затем бактериологической петлей выросшую культуру сняли с поверхности агаровой среды и нанесли на визуальные тест-полоски.

Положительная реакция: развитие фиолетовой или пурпурной окраски в течение 10 с.

Идентификация характерных колоний, выросший на среде эндо, с помощью биохимических тестов (короткий пестрый ряд).

Для исследования колоний, выросших на среде эндо, отобрали три колонии, каждая из которых соответствует одному из типов колоний.

Бактерии из каждой колонии стерильной петлей засеяли в пробирки, заполненные средой Олькеницкого, следующим образом: на скошенной части посев осуществляли легкими штрихами петлей по поверхности питательной среды; затем, у основания скошенной части, петлей делали прокол до дна пробирки. Важно при проведении посева не касаться петлей внутренних и внешних стенок пробирок.

После каждого посева петлю прокаливали над пламенем спиртовки.

Темные колонии также исследовали на следующих средах: арабиноза, моноза, сахароза. Посев осуществляли стерильной петлей путем прокола питательной среды. Пожелтение скошенной части агара указывает на расщепление лактозы, сахарозы или обоих сахаров; пожелтение столбика агара — на расщепление глюкозы. В столбике агара отмечают наличие газа в виде пузырьков.

2.7. Статистическая обработка результатов

На первом этапе проводили подсчет колоний на различных средах.

2. Сравнили полученные результаты с требованиями СанПиН [4], [7] и ГОСТ [6] и сделали вывод о соответствии данных проб санитарно-микробиологическим нормам.

Определение коэффициента самоочищения.

Отметим, что при исследовании проб воды в лабораторных условиях на питательных средах при 22°С вырастают обычно колонии бактерий сапрофитов, а при 37°С колонии патогенных бактерий.

Коэффициент самоочищения водоема = отношение сапрофитной микрофлоры к патогенной. При этом если коэффициент более 1, то способность к самоочищению водоема достаточна. Если равна 1, пограничное состояние, наблюдается равновесие сапрофитной и патогенной микрофлоры, что неблагоприятно отражается на способности к самоочищению. При коэффициенте менее 1, превалирует патогенные микроорганизмы, способность к самоочищению водоема отсутствует, использование воды данных источников ограничено.

Глава 3. Санитарно-микробиологический анализ воды

поверхностных водных объектов г.Волжского

Физико-химические свойства воды озера Круглое, реки Ахтубы и пляжа.

Для характеристики водных источников были проанализированы физико-химические показатели воды (Приложение 4)

Анализ проб на физико-химические свойства показал, что наиболее загрязненной и пригодной для развития патогенных бактерий и прочих микроорганизмов является вода из пробы №1, то есть из озера Круглое (незначительные следы нефтепродуктов, легкая мутность, желтоватый цвет, илистый осадок, кроме того, водоем - стоячий). Вода из проб №2 и №3 по физико-химическим свойствам является относительно чистой, однако так как этот водоем является проточным, судить только по этим показателям нельзя.

3.2. Результаты санитарно-микробиологического анализа воды поверхностных водных объектов г.Волжского.

3.2.1. Определение общей бактериальной обсемененности (общего микробного числа - ОМЧ)

В результате нашей работы на МПА рост колоний был обнаружен только через 48 часов (Приложение 5).

Примечание: колонии S-формы – с ровным краем, выпуклые, бледно-кремовые, колонии R-формы – неправильной формы, матовые, бледно-желтые.

На плотных питательных средах с разведением пробы в степени роста микроорганизмов не было обнаружено ни при 22°С, ни при 37°С.

На основании полученных результатов мы подсчитали для выявления общей бактериальной обсемененности показатель КОЕ для каждой пробы. Общее количество бактерий в 1 мл воды:

в пробе №1 (озеро Круглое) около 100 КОЕ;

в пробе №2 (река Ахтуба) – менее 10 КОЕ;

в пробе №3 (городской пляж) – 90 КОЕ.

Считают, что в чистой воде общее количество бактерий должно быть не более 100 в 1 мл воды, в воде сомнительной чистоты— от 100 до 1000, в загрязненной — свыше 1000 [7]. Соответственно, пробы №2 и №3 (река Ахтуба в разных точках сбора) можно характеризовать как относительно чистую воду. А в пробе №3 (озеро Круглое) – вода сомнительной чистоты.

Так как, согласно санитарно – эпидемиологическим правилам и нормативам – СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества» общее микробное число (ОМЧ) питьевой воды не должно превышать 50 КОЕ/мл, воду данных источников нельзя отнести к категории питьевой воды. Коэффициент самоочищения водоема №1 (озеро Круглое) составляет 1, самоочищение невозможно,

Водоем №2 (река Ахтуба) - <1 самоочищение невозможно,

Водоем №3 (городской пляж) - >1, способность к самоочищению водоема достаточна.

3.2.2. Определение санитарно-показательных микроорганизмов

В нашем исследовании 0,1 мл из каждой пробы анализируемого водоема был засеян прямым методом на среду Эндо. Через 24 ч на фильтрах был обнаружен рост колоний, характерный для БГКП: красные, темно-красные с металлическим блеском или без него (лактозоположительные).

Из культуры колоний готовили мазки, окрашивали по Граму, а также проводили оксидазный тест. В нашем исследовании в каждой пробе анализируемого водоема было обнаружено наличиехарактерной морфологии и отрицательного теста на оксидазу, что свидетельствует о присутствии БГКП (бактерий группы кишечной палочки).

Число колоний, не обладающих оксидазной активностью, подсчитывали на содержание их в 1 л. (Приложение 6)

Вода поверхностных источников хозяйственно-питьевого водоснабжения не должна содержать возбудителей кишечных заболеваний, а число БГКП (коли-индекс) должно быть не более 10 000 в 1 л воды.

По результатам нашего исследования вода в пробе №1 и №3 (озеро Круглое и городской пляж) содержит число БГКП более 10 000 в 1 л воды (12000 и 11000, соответственно), что говорит о неприемлемости использования данных источников для хозяйственно-питьевого водоснабжения.

Вода в реке Ахтуба (проба №2) удовлетворяет требованиям по содержанию количества БГКП (менее 1000 в 1 л воды) и может быть использована для хозяйственно-питьевого водоснабжения.

Отметим, что проба №2 и №3 – это вода реки Ахтуба в разных точках забора: вне рекреации и городской пляж, активно использующийся для отдыха и купания. В связи с этим, повышение количества БГКП в точке забора пляжа обусловлен антропогенным фактором.

Результаты идентификации выделенных морфологически и тинкториально характерных лактозоположительных оксидазоотрицательных колоний биохимическими методами.

   

Биохимические свойства колоний БГКП (короткий «пестрый ряд»):

а – Темные колонии на среде Олькеницкого и сахарах;

б – Среда Олькеницкого – слева направо: темные, красные, светлые колонии.

А) виду E. coli (кишечной палочки)

Б)роду Pseudomonas (псевдомонады)

 

Далее мы проводили идентификацию отдельных колоний БГКП методом короткого пестрого ряда. Результаты биохимических свойств исследуемых колоний приведены (Приложение 7, 8).

Заключение

Для выполнения задач нашего исследования нами были отобраны два водоема: озеро Круглое и река Ахтуба. На реке Ахтуба пробы собирались в двух точках (городской пляж и участок реки, не являющийся официально разрешенным местом для купания).

В основной части исследования мы провели санитарно-микробиологический анализ воды поверхностных водных объектов г. Волжского. Полученные результаты микробиологического анализа позволяют сделать вывод о санитарном благополучии исследуемых водоемов и отнесении воды этих источников к категории чистой. Нами проведена идентификация выделенных морфологически и тинкториально характерных лактозоположительных оксидазоотрицательных колоний биохимическими методами. Таким образом, в результате проведенного исследования проб воды из водоемов г. Волжского были идентифицированы стафилококки, псевдомонады, бактерии группы кишечной палочки. Бактерии рода Vibrio во всех пробах отсутствуют.

В результате статистического анализа полученных результатов по показателям БГКП, ОКБ, мы пришли к выводу, что вода озера Круглое является менее пригодной для использования в рекреационных целях.

Проба воды реки в месте городского пляжа обладает высокой степенью обсемененности сапрофитными микроорганизмами, а также БГКП из-за антропогенного воздействия.

Вода из реки Ахтуба во второй точке забора (участок реки, не являющийся официальным пляжем) обладает самыми оптимальными показателями, значит, река Ахтуба является наиболее пригодной и безопасной зоной для отдыха.

Список используемых источников

Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30.03.1999 N 52-ФЗ (действующая редакция, 2016)

МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов. Методические указания». Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ (03.03.2004)

МУК 4.2.2314-08 «Методы санитарно-паразитологического анализа воды».Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ (18.01.2008)

СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»

ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб». Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 21 апреля 2000 г. № 117-ст

ГОСТ 27065-86 (СТ СЭВ 5184-85) «Качество вод. Термины и определения». (введен в действие постановлением Госстандарта СССР от 29 октября 1986 г. N 3306). Переиздание. Ноябрь 2003 г.

Гигиенические требования к охране поверхностных вод: Санитарные правила и нормы. СанПиН 2.1.5.980-00 - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000.

Буйволов Ю. А. Физико-химические методы изучения качества природных вод. – М.: Экосистема, 1997. – 17 с.

Поздеев О.К. Медицинская микробиология. / Под редакцией акад. Рамн В.И.Покровского . – М: ГЭОТАР-Медиа, 2010. —768 с.

Практикум по микробиологии: Учебное пособие для студентов высших учебных заведений./ Под редакцией А.И.Нетрусова. – М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 608 с.

Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. - М.: Колос, 1979. - 216 с.

Экологический мониторинг: Учебно-методическое пособие. Изд. 3-е, испр. и доп. / Под ред. Т.Я. Ашихминой. – М.: Академический Проект, 2006. —416 с.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Таблица 1

     

Показатели

Единицы измерения

Нормативы

Термотолерантные колиформные бактерии

Число бактерий в 100 мл

Отсутствие

Общие колиформные бактерии

Число бактерий в 100 мл

Отсутствие

Общее микробное число

Число образующих колонии бактерий в 1 мл

Не более 50

Приложение 1

Приложение 2

Приложение 3

Приложение 4

Таблица 3. Физико-химические свойства воды выбранных водоемов

Водоем

Параметры

Проба №1

(озеро Круглое)

Проба №2

(река Ахтуба)

Проба №3

(городской пляж на реке Ахтуба)

Температура

22,5°С

23°С

22°С

pH

6

6

6

Загрязнение

нефтепродуктами

Незначительные следы нефтепродуктов

Не обнаружены

Не обнаружены

Прозрачность

(визуально)

Слегка мутноватая

Прозрачная

Прозрачная

Прозрачность

(по шрифту)

15 см

20 см

20 см

Цветность

Желтоватый

Отсутствует

Слегка зеленоватый

Осадок

Заметный илистый

Отсутствует

Отсутствует

Запах

Выраженный

болотистый

Нейтральный

Слегка илистый

Жесткость

Относительно мягче

Норма

Норма

Приложение 5

Таблица 4. Общая бактериальная обсемененность водоемов

пробы

22°С

(сапрофитные)

37°С

(патогенные)

Коэффициент самоочищения

Проба 1

(Круглое озеро)

10 колоний:

R-форма – 4к,

S-форма – 6к

10 колоний - S-форма

1

Проба 2

(река Ахтуба)

0 колоний

3 колонии – S-форма

<1

Проба 3

(городской пляж)

9 колоний – S-форма

2 колонии – S-форма

>1

Приложение 6

Таблица 5. Среднее число БГКП, выделенные из проб водоемов (озеро Круглое, река Ахтуба и городской пляж)

Тип колоний

Водоем

Темные (с отпечатком на обратной стороне фильтра)

Светлые (без отпечатка на обратной стороне фильтра)

Общее число колоний

Проба№1

(озеро Круглое)

13

13

26

Проба№2

(озеро Круглое)

11

5

16

Среднее число (озеро Круглое)

12

9

21

БГКП в 1 л

12000

   

Проба№1

(река Ахтуба)

6

6

Проба№2

(река Ахтуба)

9

9

Среднее число

(река Ахтуба)

8

8

БГКП в 1 л

менее 1000

   

Проба№1

(городской пляж)

17

23

40

Проба№2

(городской пляж)

5

31

36

Среднее число

(городской пляж)

11

27

38

БГКП в 1 л

11000

   

Приложение 7

Таблица 6. Биохимические свойства колоний БГКП

Тип колоний

Среды

1. Темные, с металлическим блеском

2. Красные цвета

3. Светлые, без отпечатка на обратной стороне фильтра

Арабиноза

+

х

х

Глюкоза

+

х

х

Сахароза

-

х

х

Среда Олькеницкого

+/+

Газ

+/+

Газ

-/+

Газ

Сероводород (черное окрашивание – кольцо между скошенной частью и столбиком) – не обнаружен

Обозначение: «+» - изменение цвета; - изменения цвета нет;

х – исследо вания не проводились; +/+ - скошенная часть

агара/столбик агара

Приложение 8

Таблица 7. Среднее число БГКП, выделенных из проб водоемов (озеро Круглое, река Ахтуба и городской пляж).

Тип колоний

Водоем

ОКБ в 100 мл

ТКБ в 100 мл

Озеро Круглое

менее 500

менее 100

Река Ахтуба

менее 100

0

Городской пляж

менее 500

менее 100

Просмотров работы: 614