II Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся
Старт в науке
РАБОТА: ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ И ЕЕ ВОЗМОЖНОСТИ НАУЧНО ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА.
Автор работы награжден дипломом победителя II степени
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
На данном этапе развития различных наук мы достигли многого. Путем упорного труда и постоянного изучения полученных материалов сделано большое количество открытий, которые играют важную роль в развитии человечества и, безусловно, продвигают нас вперед, подтверждая постоянное и непрерывное движение прогресса. Современный уровень наших знаний биохимии, молекулярной биологии и генетики позволяет рассчитывать на успешное развитие новой биотехнологии – генной инженерии.
Для более понятного восприятия данного текста: биохимия - наука о химическом составе живых клеток и организмов, о лежащих в основе их жизнедеятельности химических процессах. Молекулярная биология – комплекс биологических наук, изучающих механизмы хранения, передачи и реализации генетической информации, строение и функции нерегулярных биополимеров (белков и нуклеиновых кислот). Генетика – это наука о закономерностях наследственности и изменчивости. В зависимости от объекта исследования классифицируют генетику растений, животных, микроорганизмов и др. В зависимости от используемых методов других дисциплин – молекулярную генетику, экологическую генетику и др. Идеи и методы генетики играют важную роль в медицине, сельском хозяйстве, микробиологической промышленности, а так же в генетической инженерии. Биотехнология – это дисциплина, изучающая возможности использования живых организмов, их систем или продуктов из жизнедеятельности для решения технологических задач.
Генной инженерии будет посвящена целая глава в данной исследовательской работе. Но на этом этапе я уже могу смело сказать, что генетическая инженерия – это будущее. Направление невероятно перспективное, так как оно работает с генами, которые в свою очередь являются одной из самых важных изучаемых вещей именно в настоящее время. С помощью этой дисциплины мы будем способны на многое: внедрение нужных нам генов в живой организм, исправление наследственных болезней, предотвращение генных мутаций, улучшение тех или иных организмов для различных экспериментов, проведенных на них же, а возможно и то, что это плавный путь к решению важного вопроса, волнующего человечество в течение многих лет: путь к бессмертию человеческого организма.
Я выбрала именно эту тему для написания своей научно-исследовательской работы потому, что это невероятно важная составляющая жизни современного общества. Это нужно нам, и поможет решить множество задач, поставленных уже многие тысячелетия. Да, безусловно, как прогрессирующая наука, она не сможет стоять на месте. И когда человек достигнет определенного уровня, позволяющего ему решать слишком трудные поставленные вопросы, то нужно будет вовремя остановиться. Но то, что мы сможем узнать с помощью развития этой дисциплины на данный момент – бесценно. Продвижение науки и изучение геномов человека для меня первенствующий приоритет, именно поэтому я настолько глубоко заинтересована в генетике и различных ее областях. Мы должны стремиться к совершенствованию всего, и данное «учение» нам в этом поможет.
Целей и задач огромное множество, но лично я выбрала для себя более значимую и весомую: усовершенствование человеческого организма путем изменения генов и продление высококачественной жизни. Бесспорно, это лишь мое субъективное мнение и для какого-либо человека приоритетом может стать абсолютно другая цель, но я считаю эту наиболее важной на сегодняшний момент, так как то же стремление человека в космос, стремление покорить другие планеты и изменение тех или иных факторов жизни на нашей планете вынуждает заранее приспособиться для них. А продление жизни всегда интересовало социум и очень часто было первостепенной задачей. Для меня эта тема является наиболее глобальной из всех. Я тщательно постараюсь развить эту задачу, показать ее значимость, плюсы и минусы и доказать необходимость ее исследования.
Понятие генной инженерии
Существует бесчисленное множество определений к этой дисциплине, но все они имеют общий смысл, не смотря на различие формулировки и добавление новых слов. Генетическая инженерия (генная инженерия) – это совокупность приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных РНК и ДНК, выделения генов из организма (клеток), осуществления манипуляций с генами и введения их в другие организмы. Генетическая инженерия не является наукой в широком смысле, но является инструментом биотехнологии, используя методы таких биологических наук, как молекулярная и клеточная биология, цитология, генетика, микробиология, вирусология, что и было приведено выше в главе «Введение». Служит для получения желаемых качеств изменяемого или генетически модифицированного организма. В отличие от традиционной селекции, в ходе которой генотип подвергается изменениям лишь косвенно, генная инженерия позволяет непосредственно вмешиваться в генетический аппарат, применяя технику молекулярного клонирования. Примерами применения генной инженерии являются: получение новых генетически модифицированных сортов зерновых культур, производство человеческого инсулина ( гормон пептидной природы, образуется в бета-клетках островков Лангерганса поджелудочной железы. Оказывает многогранное влияние на обмен практически во всех тканях ) путём использования генетически модифицированных бактерий, производство эритропоэтина ( один из гормонов почек, который контролирует эритропоэз, то есть образование красных кровяных клеток эритроцитов, используется как лечебное средство ) в культуре клеток или новых пород экспериментальных мышей для научных исследований.
Генная инженерия позволяет путем операций в пробирке переносить генетическую информацию из одного организма в другой. Перенос генов дает возможность преодолевать межвидовые барьеры и передавать наследственные признаки одних организмов другим. Носителями материальных основ генома служат хромосомы, в состав которых входят ДНК и белки.
Чтобы было более ясно представление о шеперечисленном: хромосомы – это нуклеопротеидные структуры ядре эукариотической клетки, в которых сосредоточена большая часть наследственной информации и которые предназначены для её хранения, реализации и передачи. Хромосомы чётко различимы в световом микроскопе только в период митотического или мейотического деления клетки. Набор всех хромосом клетки, называемый кариотипом, является видоспецифичным признаком, для которого характерен относительно низкий уровень индивидуальной изменчивости. ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота ) – это макромолекула (одна из трёх основных, две другие — РНК и белки), обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. С функциональной точки зрения ДНК состоит из множества блоков, хранящих определенный объем информации — генов. В основе действия гена лежат его способность через посредство РНК определять синтез белков. РНК ( Рибонуклеиновая кислота ) - это одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов. Так же, как ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), РНК состоит из длинной цепи, в которой каждое звено азывается нуклеотидом. Каждый нуклеотид состоит из азотистого основания, сахара рибозы и фосфатной группы. Последовательность нуклеотидов позволяет РНК кодировать генетическую информацию.
Поскольку в организмах присутствуют десятки тысяч белков, существуют и десятки тысяч генов. Совокупность всех генов клетки составляет ее геном. Все клетки организма содержат одинаковый набор генов, но в каждой из них реализуется различная часть хранимой информации. Поэтому, например, нервные клетки и по структурно-функциональным, и по биологическим особенностям отличаются от клеток печени.
Перестройка генотипов
Перестройка генотипов при выполнении задач генной инженерии представляет собой качественные изменения генов, не связанные с видимыми в микроскопе изменениями строения хромосом. Изменение генов, прежде всего, связано с преобразованием химической структуры ДНК. Информация о структуре белка, записанная в виде последовательности нуклеотидов, реализуется в виде последовательности аминокислот в синтезируемой молекуле белка. Изменение последовательности нуклеотидов в хромосомной ДНК, выпадение одних и включение других нуклеотидов меняют состав образующихся на ДНК молекул РНК, а это, в свою очередь, обуславливает новую последовательность аминокислот при синтезе. В результате в клетке начинает синтезироваться новый белок, что приводит к появлению у организма новых свойств. Сущность методов генной инженерии заключается в том, что в генотип организма встраиваются или исключаются из него отдельные гены или группы генов. В результате встраивания в генотип ранее отсутствующего гена можно заставить клетку синтезировать то, что она раньше не синтезировала, как и было показано на примере с синтезацией белков.
Но по сути изменения генов в живых клетках — это мутации. Они происходят под действием, например, мутагенов — химических ядов или излучений. Такие изменения нельзя контролировать или направлять. Именно поэтому ученые разработали способ, который приведен выше: введение новых генов, совершенно определенных и нужных тому или иному существу, например, человеку. Давайте же рассмотрим это способ поподробнее , ознакомимся с его этапами, так называемыми этапами решения генно-инженерной задачи.
Этапы решения генно-инженерной задачи
Сама задача является методом получения рекомбинантных, т.е. содержащих чужеродный ген, плазмид. Плазмиды – это небольшие кольцевые двухцепочные молекулы ДНК, физически отдельные от геномных хромосом и способные реплицироваться автономно, состоящие из нескольких тысяч пар нуклеотидов. Именно этот процесс и имеет этапы, которые в свою очередь являются решением:
1. Получение изолированного гена.
2. Введение гена в вектор для переноса в организм.
3. Перенос вектора с геном в модифицируемый организм.
4. Преобразование клеток организма.
5. Отбор генетически модифицированных организмов (ГМО) и устранение тех, которые не были успешно модифицированы.
Вектор – это молекула нуклеиновой кислоты, чаще всего ДНК, используемая в генетической инженерии для передачи генетического материала другой клетке.
Процесс синтеза генов в настоящее время разработан очень хорошо и даже в значительной степени автоматизирован. Существуют специальные аппараты, снабжённые ЭВМ, в памяти которых закладывают программы синтеза различных нуклеотидных последовательностей. Такой аппарат синтезирует отрезки ДНК длиной до 100—120 азотистых оснований (олигонуклеотиды). Получила распространение техника, позволяющая использовать для синтеза ДНК, в том числе мутантной, полимеразную цепную реакцию. Термостабильный фермент, ДНК-полимераза, используется в ней для матричного синтеза ДНК, в качестве затравки которого применяют искусственно синтезированные кусочки нуклеиновой кислоты — олигонуклеотиды. Фермент обратная транскриптаза позволяет с использованием таких затравок (праймеров) синтезировать ДНК на матрице, выделенной из клеток РНК. Синтезированная таким способом ДНК называется комплементарной РНК или ДНК. Изолированный, «химически чистый» ген может быть также получен из фаговой библиотеки. Так называется препарат бактериофага, в геном которого встроены случайные фрагменты из генома или ДНК, воспроизводимые фагом вместе со всей своей ДНК.
Чтобы встроить ген в вектор, используют ферменты — рестриктазыилигазы, также являющиеся полезным инструментом генной инженерии. С помощью рестриктаз ген и вектор можно разрезать на кусочки. С помощью лигаз такие кусочки можно «склеивать», соединять в иной комбинации, конструируя новый ген или заключая его в вектор. За открытие рестриктаз Вернер Арбер, Даниел Натанс и Хамилтон Смит также были удостоены Нобелевской премии в 1978 г.
Техника введения генов в бактерии была разработана после того, как Фредерик Гриффит открыл явление бактериальной трансформации. В основе этого явления лежит примитивный половой процесс, который у бактерий сопровождается обменом небольшими фрагментами нехромосомной ДНК, плазмидами. Плазмидные технологии легли в основу введения искусственных генов в бактериальные клетки.
Если модификации подвергаются одноклеточные организмы или культуры клеток многоклеточных, то на этом этапе начинается клонирование, то есть отбор тех организмов и их потомков (клонов), которые подверглись модификации. Когда же поставлена задача получить многоклеточные организмы, то клетки с изменённым генотипом используют для вегетативного размножения растений или вводят в бластоцисты суррогатной матери, когда речь идёт о животных. В результате рождаются детеныши с изменённым или неизменным генотипом, среди которых отбирают и скрещивают между собой только те, которые проявляют ожидаемые изменения.
Клонирование
Клонирование – это появление естественным путем или получение нескольких генетически идентичных организмов путем бесполого ( в том числе вегетативного) размножения. С помощью клонирования можно получить более миллиона копий любого фрагмента ДНК человека или другого организма. Если клонированный фрагмент кодирует белок, то экспериментально можно изучить механизм, регулирующий транскрипцию этого гена, а также наработать этот белок в нужном количестве. Кроме того, клонированный фрагмент ДНК одного организма можно ввести в клетки другого организма. Этим можно добиться, например, высокие и устойчивые урожаи благодаря введенному гену, обеспечивающему устойчивость к ряду болезней. Если ввести в генотип почвенных бактерий гены других бактерий, обладающих способностью связывать атмосферный азот, то почвенные бактерии смогут переводить этот азот в связанный азот почвы. Введя в генотип бактерии кишечной палочки ген из генотипа человека, контролирующий синтез инсулина, ученые добились получения инсулина при посредстве такой кишечной палочки. При дальнейшем развитии науки станет возможным введение в зародыш человека недостающих генов, и тем самым позволит избежать генетических болезней. Эксперименты по клонированию животных ведутся давно. Достаточно убрать из яйцеклетки ядро, имплантировать в нее ядро другой клетки, взятой из эмбриональной ткани, и вырастить ее — либо в пробирке, либо в чреве приемной матери. Клонированная овечка Доли была создана нетрадиционным путем. Ядро из клетки вымени 6-летней взрослой овцы одной породы пересадили в безъядерное яйцо овцы другой породы. Развивающийся зародыш поместили в овцу третей
породы. Так как родившаяся овечка получила все гены от первой овцы — донора,
то является ее точной генетической копией. Этот эксперимент открывает массу
новых возможностей для клонирования элитных пород, взамен многолетней селекции.
Нокаут гена
Для изучения функции того или иного гена может быть применен нокаут гена. Так называется техника удаления одного или большего количества генов, что позволяет исследовать последствия подобной мутации. Для нокаута синтезируют такой же ген или его фрагмент, изменённый так, чтобы продукт гена потерял свою функцию. Для получения нокаутных мышей полученную генно-инженерную конструкцию вводят в эмбриональные стволовые клетки, где конструкция подвергается соматической рекомбинации и замещает нормальный ген, а измененные клетки имплантируют в бластоцисту суррогатной матери. У плодовой мушки дрозофилы мутации инициируют в большой популяции, в которой затем ищут потомство с нужной мутацией. Сходным способом получают нокаут у растений и микроорганизмов.
Искусственная экспрессия. Логичным дополнением нокаута является искусственная экспрессия, то есть добавление в организм гена, которого у него ранее не было. Этот способ генной инженерии также можно использовать для исследования функции генов. В сущности, процесс введения дополнительных генов таков же, как и при нокауте, но существующие гены не замещаются и не повреждаются.
Визуализация продуктов генов. Используется, когда задачей является изучение локализации продукта гена. Одним из способов мечения является замещение нормального гена на слитый с репортёрным элементом, например, с геном зелёного флуоресцентного белка (GFP). Этот белок, флуоресцирующий в голубом свете, используется для визуализации продукта генной модификации. Хотя такая техника удобна и полезна, её побочными следствиями может быть частичная или полная потеря функции исследуемого белка. Более изощрённым, хотя и не столь удобным методом является добавление к изучаемому белку не столь больших олигопептидов, которые могут быть обнаружены с помощью специфических антител.
Исследование механизма экспрессии. В таких экспериментах задачей является изучение условий экспрессии гена. Особенности экспрессии зависят, прежде всего от небольшого участка ДНК, расположенного перед кодирующей областью, который называется промотор и служит для связывания факторов транскрипции. Этот участок вводят в организм, поставив после него вместо собственного гена репортерный, например, GFP или фермента, катализирующего легко обнаруживаемую реакцию. Кроме того, что функционирование промотора в тех или иных тканях в тот или иной момент становится хорошо заметным, такие эксперименты позволяют исследовать структуру промотора, убирая или добавляя к нему фрагменты ДНК, а также искусственно усиливать его функции.
Схема строения зеленого флуоресцентного белка:
Раскрытие главной проблемы, изменение генов человека
В применении с человеком генная инженерия могла бы добиться и, собственно, добьется многого. Но главная проблема заключается в том, что иногда нужно вылечить именно самого пациента, а не с помощью лечения изменить и геном его потомков. Задача изменения генома взрослого человека несколько сложнее, чем выведение новых генно-инженерных пород животных, так как в данном случае требуется изменить геном многочисленных клеток уже сформировавшегося организма, а не одной лишь яйцеклетки-зародыша. Для этого предлагается использовать вирусные частицы в качестве вектора. Вирусные частицы способны проникать в значительный процент клеток взрослого человека, встраивая в них свою наследственную информацию; возможно контролируемое размножение вирусных частиц в организме. При этом для уменьшения побочных эффектов учёные стараются избегать внедрения генно-инженерных ДНК в клетки половых органов, тем самым избегая воздействия на будущих потомков пациента. Также стоит отметить значительную критику этой технологии в СМИ: разработка генно-инженерных вирусов воспринимается многими как угроза для всего человечества.
Так как СМИ очень влияют на социум и из-за нежелательных статей и многого подобного этому, данный способ может быть запрещен, то нужно иметь и запасной вариант, о котором я и хочу поговорить, он собственно и является главным смыслом этой научно-исследовательской работы (возможно, по ходу работы я найду и еще несколько дополнительных вариантов). Вместо внедрения гена можно изменить его внутреннюю информацию и отключить главные функции, мешающие организму. Так, к примеру, можно отключить функцию гена, влияющего на развитие наследственной болезни. Но это не главное, о чем я хочу повествовать. Изначально передо мной лежала такая задача, как усовершенствование человеческого организма путем изменения генов и продление высококачественной жизни. Но, исходя из выше написанных слов о том, что изменение гена более сложно провести, то давайте рассмотрим наипростейший вариант для решения этой поставленной задачи.
Вариант 1.
Я буду основываться на теории, предоставленной на сайте научного журнала: http://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=30279 . Она гласит о том, что группой исследователей из Вистарского института штата Филадельфия, США (The Wistar Institute, Philadelphia) был обнаружен ген p21, отличающийся своим специфическим свойством: блокирование регенеративных возможностей организма. « Эксперименты на мышах показали, что организм грызунов, с отсутствующим геном р21 может регенерировать утраченные или поврежденные ткани. В отличие от обычных млекопитающих, у которых раны заживляются путем образования шрамов, у генетически модифицированных мышей с поврежденными ушами на месте раны образуется бластема - структура, связанная с быстрым ростом клеток. В ходе регенерации из бластемы образуются ткани восстанавливающегося органа. По словам ученых, при отсутствии гена р21 клетки грызунов ведут себя как регенерирующие эмбриональные стволовые клетки. А не как зрелые клетки млекопитающих. То есть, они скорее выращивают новую ткань, чем восстанавливают поврежденную. Здесь будет уместно вспомнить, что такая же схема регенерации присутствует и у саламандр, обладающих возможностью отращивать заново не только хвост, но и утерянные конечности, или у планарий, ресничных червей, которых можно разрезать на несколько частей, и из каждого кусочка вырастет новая планария » - говорится в данной статье.
Исходя из первых некоторых абзацев, в которых говорится о гене p21 (остальная информация не заимствована для работы), я могу сделать вывод, что данный ген появился в связи с усложнением нашего организма, прошедшим благодаря эволюции. Рассмотрим гидру: поврежденная особь легко восстанавливает утраченные части тела, даже в том случае, если ее расчленить на множество частей. Благодаря интенсивному делению промежуточных клеток из каждой части образуется новая гидра. Но ее внутреннее и внешнее строение настолько упрощенное, что организму достаточно легко произвести этот процесс регенерации. Наш же организм оснащен сложными системами, выполняющими не менее сложные функции и связанными между собой. Каждая частичка нашего тела невероятно усложнена по сравнению с теми же Кишечнополостными и Саркодовыми. Я считаю, что именно из-за этого у нас появился данный барьер для проведения регенеративных функций.
После прочтения этого текста может создаться впечатление, что все невероятно просто: видоизменили информацию гена и усовершенствовали человека. Но как в любой сверхсложной операции, связанной с человеком, его внутренним строением и генами здесь есть свои нюансы, которые просто необходимо учитывать. Да, эксперименты на мышах был проведены и, по сути, в них ничего не изменилось кроме отключения p21 и появления новых возможностей, но неизвестно, как отреагирует наш организм на деятельность такого рода. Так же, теоретически, отключение этого гена может повлечь за собой больший, чем был, риск возникновения рака. Но не смотря на это, у генномодифицированных мышей не обнаружили следов рака, наоборот, усилился механизм апоптоза, который защищает от возникновения опухолей. Если в дальнейших проведенных экспериментах на приматах будет выявлен большой риск возникновения раковых опухолей, то следует работать и с другими генами, видоизменять их и заставлять организм человека ставить преграду между возникновением данной болезни.
Все это невероятно сложно, требует дальнейших тщательных исследований и экспериментов, ну а я лишь могу предполагать и выдвигать свои теории и мысли на этот счет.
Вариант 2.
Судя по недавним открытиям в областях генной инженерии и прочих тому подобных наук можно заметить одну немаловажную и крайне интересную вещь: находка гена, отвечающего за выработку теломеразы. Теломераза – это фермент, добавляющий особые повторяющиеся последовательности ДНК к 3'-концу цепи ДНК на участках теломер, которые располагаются на концах хромосом в эукариотических клетках. Теломеры содержат уплотнённую ДНК и стабилизируют хромосомы. При каждом делении клетки теломерные участки укорачиваются.
Но, кажется, причем тут теломеразы и некое бессмертие человека?
Мое мнение заключается в том, что старение происходит из-за потери теломеры при каждом делении клетки. Хоть она и незначительная, даже ничтожная, но с годами она сказывается довольно таки сильно, человек стареет, клетки уже не те, что были раньше, и из-за этого организм больше не способен существовать. Мой второй вариант усовершенствования человеческого организма заключается в том, чтобы имплантировать этот ныне открытый ген человеку, но перед этим немного видоизменить его: усилить в несколько раз выработку теломеразы. Безусловно, это не будет являться бессмертием, но продолжительность жизни, думаю, увеличится на достаточное количество лет.
Заключение
Вот и две моих основных теории на счет главного поставленного передо мной вопроса в этой исследовательской работе. Но теория, или даже ее качественное выполнение на практике не самое важное. Дело в том, что отключая ген p21 или имплантируя ген, отвечающий за выработку теломеразы, человек становится качественнее. Продление жизни, кондиционная регенерация тех или иных частей человека – вот то, к чему приведут эти действия. И, казалось бы, что в этом плохого? Это несет лишь добро, желание помочь людям и как-то продлить собственную жизнь, ведь она слишком коротка для совершения грандиозных поступков, для набирания сверхважного жизненного опыта, для путешествий по всему миру, для собственных маленьких открытий. И если все эксперименты пройдут, если эти теории будут верны, то будет же только лучше.
Но везде есть свои исключения. Мир, к сожалению, не наполнен добрыми и милосердными людьми. В нем много зла, грубости, жестокости, и желания убивать, как бы страшно это не звучало. Постоянные конфликты и войны тому подтверждение. И если произойдет массовое усовершенствование человеческого организма, то получается, что даже человек с ужасными мыслями в голове может это сделать. Он не сразу проявит свои зверские качества, он будет вынашивать это с собой, продлит свою жизнь и начнет творить то, что давно запланирован. Этот вопрос должен решаться государством, и , возможно, в этом поможет создание специального комитета, который с помощью специальных машин будет сканировать тайные желания, направленные на социум, и на их почве делать вывод, дать ли человеку дополнительный шанс или нет.
Долго жить хотят все, каждый человек хоть раз об этом думал, хоть раз об этом мечтал. Но везде присутствуют свои преграды, которые лично меня жутко огорчают. Если бы мир не был наполнен такой злобой, а все люди адекватно понимали, что просто необходимо уметь контактировать без конфликтов, то продление жизни человеку сделало бы невероятную вещь, люди бы воодушевились, начали бы исполнять грандиозные планы, которые так хотелось совершить за свою короткую жизнь, но которые так и не были выполнены. Я бы отправилась путешествовать по миру, изучала бы культуры разных племен и народов, фотографировала невероятную природу местности и общалась с коренными жителями. Я бы изучала все, что могла, пополняла свой багаж знаний до невероятно высокого уровня. Я бы делала все максимально. Но как жаль, что не каждый человек хочет этого, и какой-нибудь убийца лишь будет мечтать о том, что он на несколько лет больше будет иметь возможность творить свои мерзкие жуткие злодеяния.
Список используемой литературы и источников
В.М.Константинов, В.Г Бабенко, В.С. Кучменко. Биология. – Вентана - Граф, 2014
Интернет-энциклопедия Википедия
Чебышев Н.В. Биология. − Новая волна, 2005
Рувинский А.О. Общая биология. – Просвещение, 1994
Нейман Б.Я. Индустрия микробов. – Знание, 1983
Реймонд Кэлиндер, Г.Стент. Молекулярная генетика. – Мир массива,1981