Изучение микрофлоры молока

XXIII Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся
Старт в науке

Изучение микрофлоры молока

Ежков Е.Е. 1Блохин Е.Д. 1
1МБОУ "Красносельская СШ им. И.Н. Маркеева"
Иванова Е.А. 1
1МБОУ "Красносельская СШ им. И.Н. Маркеева"
Автор работы награжден дипломом победителя II степени
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Введение

Уже несколько тысячелетий молоко является самым распространенным продуктом. На прилавках современных магазинов присутствует большой выбор данной продукции. Покупатель имеет возможность выбрать продукт разной жирности, состава, продолжительности хранения. У нас как сельских жителей, есть возможность приобрести молоко с частных хозяйств: не только коровье, но и козье. Благодаря рекламной деятельности среди населения, некоторые производители продукции приобрели большую популярность. Вследствие этого, актуальность данной работы заключается в том, что объем рынка по производству молока активно расширяется и, следовательно, увеличивается ассортимент. В связи с этим, возникает потребность в выборе, среди представленного большого разнообразия, качественного товара. Так как качество обусловлено в первую очередь их пользой, т.е. наличием в их составе микроорганизмов, проведение исследования именно этого параметра приобретает наибольшую практическую значимость. Целью исследования является изучение качественных показателей микрофлоры молока. Объектом являются молоко разных российских торговых марок и частных хозяйств. Предмет исследования: микрофлора молока. Задачи исследования: 1. Изучить состояние исследуемой проблемы в литературных источниках. 2. Провести микробиологические исследования микрофлоры молока разных торговых марок и частных хозяйств. 3. Сравнение качественных показателей микроорганизмов в продуктах с разным диапазоном срока годности. 4. Обнаружение соответствия качественных показателей микроорганизмов с действующими федеральными нормативами по ГОСТу.

Глава 1. Обзор литературы

В настоящее время ассортимент молочных продуктов непрерывно увеличивается. Это происходит за счет введения в производство новых технологических процессов и компонентов для обеспечения требований к качеству продуктов. Основной показатель качества продуктов — это питательная ценность, польза и безопасность для здоровья человека, а также лабильность в диапазоне срока годности при хранении. Всем этим качествам соответствуют молочные продукты (Федотова, 2003). Основной состав микрофлоры молока — это молочнокислые бактерии. Они в основном неподвижны, по Грамму красятся положительно, спор не образуют. Молочнокислые бактерии получают энергию только в процессе молочнокислого брожения, которое условно разделяют на гомоферментативное и гетероферментативное. Клетки молочнокислых бактерий имеют шаровидную или палочковидную форму. А. Шаровидные молочнокислые бактерииотносятся к семейству Streptococcaceae, объединяющему роды Lactococcus, Streptococcus, Pediococcus и Leuconostoc. Lactococcus lactis subspecies lactis(молочнокислый стрептококк, сокращенно Lac. lactis). Клетки сферические или овальные размером (0,5–1,2) (0,5–1,5) мкм, соединенные попарно (диплококки) или в виде коротких цепочек (Приложение 1, рис.1, а). Оптимальная температура развития составляет 28–32 С. Активные штаммы этого вида свертывают молоко за 4–6 ч, образуя ровный плотный сгусток. Lactococcus lactis ssp. cremoris(сливочный стрептококк – Lac. cremoris). Клетки шаровидные, располагаются в виде коротких и длинных цепочек (Приложение 1 рис. 1, б). Оптимальная температура роста 25–30 С. Молоко свертывает за 6–8 ч, образуя плотный сгусток слегка вязкой или сметанообразной консистенции. Lactococcus lactis ssp. lactis biovar diacetylactis(ароматобразующий стрептококк – Lac. diacetylactis). Клетки расположены чаще всего в виде диплококков и коротких цепочек (Приложение 1. рис. 1, в). Оптимальная температура роста 25–30 С. Имеет довольно слабую кислотообразующую активность – молоко свертывает за 16–18 ч. Сгусток молока плотный, часто с наличием пузырьков газа (СО2), имеет приятный специфический запах. Streptococcus salivarius ssp. thermophilus(термофильный стрептококк – S. thermophilus). Клетки имеют овальную или шаровидную форму, диаметр 0,7–1,0 мкм, часто соединены в длинные цепочки (Приложение 1. рис. 1, г). Активные штаммы свертывают молоко за 3,5–4 ч. при оптимальной температуре 40–42 С. Температурный диапазон роста составляет 20–50 С. Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris(Leuс. cremoris). Клетки шаровидные или линзовидные размером (0,5–0,7) (0,7–1,2) мкм, соединены попарно или в короткие цепочки (Приложение 1, рис. 1, д). Оптимальная температура роста составляет 22–25 С, минимальная – около 5 С. Молоко не свертывает, так как обладает низкой протеиназнойактивностью. Б. Палочковидные молочнокислые бактерииотносят к семейству Lactobacillaceae, роду Lactobacillus. Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus(болгарская палочка, или L. bulgaricus). Форма клеток в молоке – длинные и короткие палочки размером (5–20) (0,8–1,0) мкм (Приложение 1 рис. 2, а). При окрашивании препаратов из молока метиленовым синим в клетках часто наблюдаются зерна полифосфатов, иногда неравномерно окрашенные участки цитоплазмы. Оптимальная температура роста составляет 40–45 С. Молоко свертывает за 4–6 ч. Сгусток молока может иметь колющуюся или сильновязкую, слизистую консистенцию. Lactobacillus acidophilus(ацидофильная палочка). Форма клеток в молоке – длинные и короткие палочки размером 3–40 мкм и толщиной 1,0–1,5 мкм. У некоторых штаммов так же, как и у болгарской палочки, в клетках наблюдается «зернистость» (зерна полифосфатов) (Приложение 1. рис. 2, б). Оптимальная температура роста составляет 37–38 С. Молоко свертывает за 5–8 ч. Lactobacillus delbrueckii ssp. lactis(молочнокислая палочка – L. lactis). По морфологическим и биохимическим признакам она схожа с болгарской палочкой (Приложение 1. рис. 2, в). Оптимальная температура роста составляет 40–42 С; Lactobacillus helveticus(швейцарская палочка). Палочки имеют длину 2–6 мкм и толщину 1,0–1,5 мкм; располагаются одиночно или короткими цепочками (Приложение 1. рис. 2, г). Оптимальная температура их роста равна 42–45 С. Молоко свертывает за 5–6 ч. Lactobacillus сasei ssp. casei(L. casei). Палочки с прямоугольными концами размером (0,7–1,1) (2–4) мкм, располагающиеся чаще всего цепочками (Приложение 1. рис. 2, д). Оптимальная температура роста составляет 28–32 С , при температуре 45 Срост прекращается. Lactobacillus сasei ssp. rhamnosus(L. rhamnosus). Растут в молоке в виде коротких или длинных палочек толщиной 1,5 мкм, соединенных в цепочки. Часто обнаруживается зернистость клеток. Оптимальная температура роста составляет около 30 С. Lactobacillus plantarum.Палочки разной длины, соединенные в длинные и короткие цепочки (Приложение 1. рис. 2, е). Оптимальная температура составляет около 30 С. Lactobacillus brevis. Мелкие палочки с закругленными концамиразмером (0,7–1,0) (2–4) мкм (Приложение 1. рис. 2, ж).Дрожжи играют в молочной промышленности двоякую роль:одни виды принимают участие в производстве ферментированныхмолочных продуктов в качестве биологических агентов, вызывающихспиртовое брожение; другие виды способствуют порче молочных продуктов. Дрожжи, присутствующие в молочных продуктах: (спорообразующие)видов Saccharomyces lactis, Zygosaccharomyces lactis, Kluyveromyces fragilis, Debaryomyces и (неспорообразующие)Torulopsis kefir, Torulopsis sphaerica, Candida pseudotropicalis var. lactosa и др. (Приложение 1. рис. 3). (Красникова, 2013). В молочной промышленности применяется процесс пастеризации молока, который оказывает влияние на микроорганизмы, содержащиеся в его составе, в зависимости от степени температурной обработки и продолжительности нагревания. Процесс пастеризации продуктов отличается от процесса стерилизации тем, что в первом случае происходит лишь уничтожение микробов, а во втором – спор. Пастеризация не предусматривает кипячение, которое ликвидирует абсолютно всю молочную микрофлору, а очищает продукт от болезнетворных микроорганизмов (например, туберкулезных или бруцеллезных бактерий) при температуре, немного меньшей, чем температура кипения. При этом основные свойства молока (консистенция, вкус, запах) остаются практически без изменений.При пастеризации молоко нагревается до температуры, близкой к кипению. Микробы обезвреживаются, но часть из них не погибает. Такое молоко хранится в холодильнике, а потом может скиснуть. Это говорит о том, что в нём сохранились молочнокислые бактерии, приводящие к сквашиванию. При ультрапастеризации молоко всего на 4 секунды нагревается до 137°C и быстро охлаждается. Соотношение времени нагрева и температуры точно рассчитано на то, что уничтожаются даже термостойкие микроорганизмы, а витамины сохраняются. Затем в камере со стерильным воздухом молоко разливают в стерильную упаковку (асептический розлив). В нём нет микробов – значит молоко нечему сквашивать. (Горбатова, 2013).

Глава 2. Материал и методы исследования

Для анализа качественного состава микрофлоры молока нами были использованы микроскопический и микробиологический методы. Микроскопический метод заключается в изучении микроорганизмов в окрашенном состоянии при помощи микроскопа. Этот метод позволяет определить размеры, форму, расположение, структурные элементы микроорганизмов, а также их тинкториальные свойства, то есть их способность к окраске при использовании различных красителей. Данный метод используется для распознавания бактерий, помогая определение их вида. Микроскопическое исследование проводилось с использованием метода «фиксированного мазка» (Приложение 2, рис.1), (Приложение 3, рис.1,2). Следующий этап микроскопического метода – качественный микробиологический анализ. Целью такого анализа является определение групповой и видовой принадлежности микроорганизма по внешнему виду, а именно: по форме, размерам, расположению и способу деления. Методы, позволяющие наблюдать за микроорганизмами с помощью микроскопа доступны, наглядны, быстры и широко используются для анализа крупных микробов, а также при высокой концентрации микробиологического состава (Красникова, 2013). (Приложение 3, рис.3,4). Для исследования были отобраны популярные среди покупателей шесть видов молока: №1Жирность: 2.50 %, способ обработки: пастеризация, тип молока: коровье. Пищевая ценность на 100 г: белки 3 г, жиры 2.5 г, углеводы 4.7 г, энергетическая ценность 53 ккал Срок хранения: 10 дней. Условия хранения: До и после вскрытия упаковки продукт хранить при температуре 0°С до +4°С. Упаковка: бутылка Страна производства: Россия. Нижегородская область. №2 Молоко пастеризованное 930 мл, 2,5% жирности производится из нормализованного молока, полученного с отборных ферм. Вес/Объем. 900 мл Срок годности. 5 суток. Пищевая ценность на 100 г (БЖУ). жиры – 2,5 г белки – 3,0 г углеводы – 4,0 г. Энергетическая ценность на 100 г. 50 ккал. Страна производства: Россия. Республика Марий-Эл. №3 Молоко 2,5%.Состав молоко нормализованное.Пастеризаванное. Пищевая ценность белок 2,9г, жир 2,5г, углеводы 4,8г. Энергетическая ценность 53 ккал. Срок годности 14 дней. Условия хранения Хранить при температуре от +2°C до +6°C, до и после вскрытия упаковки. Страна производства: Россия. г.Москва. №4 Молоко козье. Необработанное (сырое). Частное хозяйство (ч/х). Нижегородская область. №5 Молоко коровье. Частное хозяйство (ч/х). Нижегородская область. №6 Молоко 2,5% жирности, ультрапастеризованное. Состав (на 100 г): белки - 2,8 г, жиры - 2,5 г, углеводы - 4,7 г, калорийность - 54 Ккал. Оптимальный режим хранения: прохладное место с температурой от +2 до +25 С. Срок хранения - до 6 месяцев. Производитель: республика Мордовия. В каждом образце определялся качественный бактериальный состав микрофлоры, а также изменение этих показателей в зависимости от периода срока годности, на котором они находились.

Глава 3. Результаты и их обсуждение

При проведении микроскопического и микробиологического анализа молока на начало и окончания срока годности были получены следующие результаты, представленные в таблице 1.

Таблица 1

Результаты качественного анализа микрофлоры молока

Название микроорганизмов

Наименование продукта – срок годности:

начало срока годности/окончание срока годности

образец №1

(10 дней)

образец №2

(5 дней)

образец №3

(14 дней)

Молоко козье. ч/х

образец №4

Молоко коровье ч/х

образец №5

образец №6

(6 месяцев)

1.Болгарская палочка Lactobacillusdelbrueckiissp. bulgaricus

0/+

0/+

0/+

0/+

   

2.Молочно-кислый стрептококк (Lactococcus lactis)

+/+

+/+

+/+

   

+\+

3.Термофильный стрептококк (Streptococcusthermophiles)

0/+

0/+

+/+

 

+\+

 

4.Молочно-кислый стрептококк (Streptococcus lactis)

     

+/+

+\+

 

5.Дрожжи (Kluyveromyces marxianus)

 

0/+

+/+

0/+

0/+

 

6.Дрожжи (Saccharomyces Kefiri)

   

0/+

0/+

   

7.Кокки (Micrococcussp.)

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

+/+

Как видно из таблицы 1 во всех шести образцах молока разных производителей были обнаружены молочнокислые бактерии. Данные виды встречаются как в начале срока годности продукта (приобретенного в магазинах) и во время его окончания вид (Lactococcus lactis), так и в молоке частного хозяйства: необработанное (сырое) первого дня и необработанное (кислое) шестого дня вид (Streptococcus lactis). В образце №1 в начале срока годности были обнаружены следующие микроорганизмы: повсеместно распространенные кокки (Micrococcussp.); диплококки и, расположенные в виде коротких цепочек, молочнокислые стрептококки (Lactococcuslactis) (рис.1). По окончанию срока годности встречаются единичные экземпляры болгарской палочки (Lactobacillusdelbrueckiissp. bulgaricus) (рис.2).

Рис. 1. Микрофлора образца №1 (х100) - начало срока годности

Рис. 2. Микрофлора образца №1 (х100) - окончание срока годности

При изучении качественного состава микрофлоры образца №2 были обнаружены следующие микроорганизмы: основной процент микрофлоры на начало срока годности (рис.3) составляют молочнокислый стрептококк (Lactococcuslactis) круглой формы и одиночные кокки (Micrococcus sp.). Отличие состава на окончание срока годности (рис.4) наличие микроорганизмов: болгарская палочка (Lactobacillusdelbrueckiissp. bulgaricus) и дрожжи Kluyveromyces marxianus.


Рис. 3. Микрофлора образца №2 (х100) - начало срока годности

Рис. 4. Микрофлора образца №2 (х100) – окончание срока годности

Микрофлора образца №3 на начало и окончания срока годности (рис.5). представлена в основном молочнокислым стрептококком (Lactococcuslactis); короткими и длинными цепочками термофильного стрептококка (Streptococcusthermophiles); кокки (Micrococcussp.), одним видом дрожжей (Kluyveromyces marxianus). Отличия в том, что в образце по окончании срока годности появляется второй вид дрожжей (Saccharomyces Kefiri) и часто встречается болгарская палочка (Lactobacillusdelbrueckiissp. bulgaricus) (рис.6).


Рис. 5. Микрофлора образца №3 (х100) - начало срока годности

Рис. 6 Микрофлора образца №3 (х100) – окончание срока годности

Микрофлора следующего изученного нами образца №4 молоко козье –необработанное (сырое), частного хозяйства первого дня представлен в основном: молочнокислый стрептококк Streptococcus lactis – грамположительные кокки, образующие короткие и длинные цепочки и кокки (Micrococcussp.) (рис.7). На 6 день отличия в наличие lactobacillus bulgaricus-палочковидные грамположительные бактерии, которые вызывают скисание молока и два вида дрожжей: Kluyveromyces marxianus и Saccharomyces Kefiri ( рис.8).


Рис. 7. Микрофлора образца №4 (х100) – козье молоко (частного хозяйства), необработанное (сырое) -1 день

Рис. 8. Микрофлора образца №4 (х100) – козье молоко (частного хозяйства), кислое

Микробиологический состав образца №5 молоко коровье необработанное (сырое), частного хозяйства первого и шестого дня:кокки(Micrococcussp.); короткие цепочки термофильного стрептококка (Streptococcusthermophiles) и молочнокислый стрептококк Streptococcus lactis. Отличия в образцах шестого дня наличие дрожжей – Kluyveromyces marxianus (рис. 9,10).

Рис. 9 Микрофлора образца №5 (х100) – коровье молоко (частного хозяйства), необработанное (сырое) -1 день

Рис. 10. Микрофлора образца №5 (х100) – коровье молоко (частного хозяйства), кислое – 6 день

В образце №6 в начале срока годности и по его окончание были обнаружены и молочнокислый стрептококк (Lactococcus lactis). Отличия составляет в образование коротких и длинных цепочек молочнокислого стрептококка (рис.11,рис. 12).

Рис. 11. Микрофлора образца №6 (х100) молоко "Хорошее дело" - начало срока годности

Рис. 12. Микрофлора образца №6 (х100) молоко "Хорошее дело" - окончание срока годности

Таким образом, в результате проведенного исследования качественного состава микрофлоры молока различных марок и производителей, нами были обнаружены микроорганизмы родов (Streptococcus, Lactobacillus, Lactococcus), а также рода Micrococcus, характерные для нормальной микрофлоры молока. Кроме того, определены два вида дрожжей: Kluyveromyces marxianus и Saccharomyces Kefiri, наиболее часто встречаемые в образцах по окончанию срока годности.

При сравнении результатов по видам на начало и окончания сроков годности выявлено: 1) в пробах №1, №2 -  по окончанию срока годности выявлен термофильный стрептококк (Streptococcusthermophiles). Это вид грамположительных факультативно анаэробных бактерий. Клетки имеют форму кокков (шариков), располагающихся длинными цепочками. Оптимальная температура развития Streptococcus thermophilus 40-45°С. Бактерия устойчива к кратковременной пастеризации, но погибает при высокой температурной обработке. Накапливаясь вызывает скисание молока. В пробах №3 и Молоко коровье ч/х (1 и 6 дня) микроорганизм встречается в двух образцах. Молоко козье ч/х (1 и 6 дня) и образец №6 микроорганизм не выявлен. 2) Во всех шести образцах встречаются молочнокислые кокки, относящиеся к семейству Streptococcaceae двумя родами – лактококков (Lactococcus), стрептококков (Streptococcus). Представители рода Lactococcus выглядят под микроскопом как сферические или овальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм, располагающиеся в виде отдельных одиночных клеток, попарно или короткими цепочками. Оптимальная температура 30°С. Вызывают, как правило, брожение, с образованием молочной кислоты.3) в пробах №2, №3, №4 Молоко козье. ч/х, №5 Молоко коровье ч/х – присутствуют дрожжи: (Kluyveromyces marxianus) – в образцах №№2,3,4,5; (Saccharomyces Kefiri) - №№ 3 и 4. Дрожжи могут присутствовать в сырых и кисломолочных продуктах.  Для своего развития они требуют слабокислую среду, поэтому они хорошо развиваются вместе с молочнокислыми бактериями. Отсутствует данный микроорганизм в образце № 6 ультрапастеризованное. Кроме того, нами выявлено наименьшее количество видов микроорганизмов в образце № 6 ультрапастеризованное. Срок годности 6 месяцев. Наибольшее число в образце № 3 Пастеризованное. Срок годности 14 дней. В единственном образце встречаются два вида дрожжей на начало срока годности и его окончания. При сравнение разных торговых марок молока, имеющих продолжительный и короткий срок годности можно прийти к выводу, что число видов микроорганизмов в продуктах с коротким сроком годности – пробы №1; №2; №3 Молоко ; №№4,5 молоко частных хозяйств (не обработанное)превышает число видов в продуктах с продолжительным сроком годности – образец №6 Молоко срок 6 месяцев. Это можно объяснить тем, что молоко с большим сроком годности в производстве проходят ультрапастеризацию, во время которой погибает наибольшее количество микроорганизмов, чем при пастеризации. Следовательно, для продолжения срока годности молока необходимо проводить термическую обработку. В ходе анализа, выявлено соответствие с федеральными нормативными документами по ГОСТу, одним из наиболее важных характеристик которого является качественный микробиологический состав микрофлоры молочных продуктов. (Приложение 4 рис.1).

Выводы

  1. Изучили литературные источники по теме исследования.

  2. Провели микробиологические исследования микрофлоры молока разных торговых марок и частных хозяйств. Были обнаружены микроорганизмы родов (Streptococcus, Lactobacillus, Lactococcus), а также рода Micrococcus, характерные для нормальной микрофлоры молока. Кроме того, определены два вида дрожжей: Kluyveromyces marxianus и Saccharomyces Kefiri, наиболее часто встречаемые во всех образцах по окончанию срока годности, кроме образца №1.

  3. При сравнении разных торговых марок молока, имеющих продолжительный и короткий срок годности можно прийти к выводу, что число видов микроорганизмов в продуктах с коротким сроком годности – пробы №1; №2; №3; №№4,5 молоко частных хозяйств (не обработанное)превышает число видов в продуктах с продолжительным сроком годности – образец №6 (срок 6 месяцев). Это можно объяснить тем, что молоко с большим сроком годности в производстве проходят ультрапастеризацию, во время которой погибает наибольшее количество микроорганизмов, чем при пастеризации. Следовательно, для продолжения срока годности молока необходимо проводить термическую обработку.

  4. В ходе анализа, выявлено соответствие с федеральными нормативными документами по ГОСТу, одним из наиболее важных характеристик которого является качественный микробиологический состав микрофлоры молочных продуктов.

Список литературы

  1. Федеральный закон «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ (в редакции Федерального закона от 22.07.2010 № 163-ФЗ).

  2. ГОСТ 9225-94. Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа.

  3. Берджи, Р. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 1: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. – М.: Мир, 1997. – 432 с.

  4. Берджи, Р. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 2: Пер. с англ./Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уилльямса. – М.: Мир, 1997. – 368 с.

  5. Бредихин, С.А. Технология и техника переработки молока [Текст]/ С.А. Бредихин, Ю.В. Космодемьянский, В.Н. Юрин. – М.: Колос, 2003. – 400 с.

  6. Горбатова, К. К. Биохимия молока и молочных продуктов. – М.: Колос, 1997. – 288 с.

  7. Горбатова, К.К. Биохимия молока и молочных продуктов [Текст]/ К.К. Горбатова. – СПб.: ГИОРД, 2013. – 320 с.

  8. Красникова, Л.В. Микробиология молока и молочных продуктов: Лабораторный практикум [Текст]: учеб.-метод. пособие / Л.В. Красникова, П.И. Гунькова, В.В. Маркелова. – СПб.: НИУ ИТМО; ИХиБТ, 2013. – 85 с.

  9. Степаненко, П.П. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии молока и молочных продуктов [Текст]. – М.: Лира, 2005. – 652 с.

  10. Харитонов, В.Д. Продукты лечебного и профилактического назначения: основные направления научного обеспечения [Текст]/ В. Д. Харитонов, О. Б. Федотова // Молочная промышленность – 2003. – №12. – С. 71-72.

Приложение 1

Рис. 1. Молочнокислые стрептококки и лейконостоки:
а – Lac. lactis; б – Lac. cremoris; в – Lac. diacetilactis;
г – S. thermophilus; д – Leuс. cremoris

Рис. 2. Молочнокислые палочки:
а – L. bulgaricus; б – L. acidophilus; в – L. lactis; г – L. helveticus;
д – L. rhamnosus; е – L. plantarum; ж – L. fermentum; з – L. brevis; и – L. саsei

Рис. 3. Дрожжи
аTorulopsis candida; бKluyveromyces fragilis;
вCandida crusei; гSaccharomyces cerevisiae

Приложение 2

Метод «фиксированного мазка»

Метод заключается в следующее: при приготовлении препарата на обезжиренное при помощи кусочка мыла, предметное стекло наносится изучаемый материал: молоко. Затем, при помощи бактериологической петли, каплю распределяют по предметному стеклу на площади 1 см2 приблизительно тонким и равномерным слоем. Мазок высушивается над струей теплого воздуха пламени горелки, не давая капле сильно нагреться. Далее полученный препарат фиксируется. Фиксация производится путем проведения препарата (мазком вверх) над пламенем горелки 3-4 раза, контролируя температуру предметного стекла тыльной стороной ладони (50-60о). При этом ощущается легкое жжение ладони, а при перегреве сильное жжение. Перегрев препарата может вызвать деформацию клеток и изменение их формы и структуры строения. Следующим этапом приготовления фиксированного мазка является окраска препарата. Так как для большинства микроорганизмов характерен прозрачный вид, то для наиболее удобного изучения их структуры и анализа их жизнедеятельности используют биологические методы окрашивания, которые увеличивают контрастность изображения. При выполнении исследования нами использовались катионные красители: основной фуксин и метиленовый синий, обладающие свойствами оснований. Эти красители проникают внутрь клетки окрашивая клеточную мембрану не оказывая воздействие на жизнедеятельность микроорганизмов. Приготовленный фиксированный мазок помещают над ванночкой, расположив их на параллельные рейки. Далее препарат накрывается небольшим кусочком фильтровальной бумаги, на которую наносится несколько капель водного раствора фуксина (метиленовый синий). Фильтровальная бумага используется для равномерного распределения красителя по поверхности препарата. Окрашивание производится в течение 2-3 минут, после чего фильтровальная бумага удаляется, а окрашенный материал промывается водой и просушивается. Полученные образцы просматриваются под микроскопом. Затем препараты зарисовываются и фотографируются (Прунтова, 2005).

Приложение 3

Рис 1. Подготовка образцов молока к нанесению мазка

Рис 2. Приготовления фиксированного мазка и окрашивание препарата.

Рис 3. Наблюдение за микроорганизмами с помощью микроскопа

Рис 4.,5 Определение групповой и видовой принадлежности микроорганизма

Приложение 4

Допустимыеуровнисодержаниямикроорганизмоввпродуктахпереработкимолокапривыпускеихв обращение

Продукт

КМАФАнМ*(1),

КОЕ*(2)/см3

(г),неболее

Объем(масса) продукта,см3(г), вкоторой не допускаются

Дрожжи(Д), плесени(П),

КОЕ/см3

(г),не более

Примечание

   

БГКП*(3

)

(колифор мы)

Патоген-

ные,втом числе сальмоне

ллы

стафило коккиS. aureus

листерии L.monocyto genes

   

1

2

3

4

5

6

7

8

   

I.Питьевоемолоко,питьевыесливки,молочныйнапиток,молочнаясыворотка,пахта,продуктынаихоснове,термически обработанные

   

1.Молокопитьевое,молочный

                 

напиток,в потребительской

таре,втомчислеобогащенные витаминами, макро- и

микроэлементами,лактулозой, пребиотиками:

                 

а)пастеризованные

105

0,01

25

1

25

-

     

б) стерилизованные

-

-

-

-

-

-

требования промышленной стерильности:

   

в)ультрапастеризованные

(УВТ)(с асептическим

-

-

-

-

-

-

а)после термостатной

выдержки

   
 

г)ультрапастеризованные(без

асептическогорозлива)

100

10

100

10 25

 

т емпературе 37°С в течение 3 - 5 суток отсутствиевидимых

дефектов и признаков порчи(вздутие упаковки, изменениевнешнеговида

идругие),отсутствие изменений вкуса и консистенции

б) после термостатной выдержкидопускаются изменения:

титруемой кислотности - не более чем на 2°T КМАФАнМ-неболее10

КОЕ/см3(г)

Примечания: 1. Гигиенические нормативы по микробиологическим показателям безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов включают в себя следующие группы микроорганизмов:санитарно-показательные, к которым относятся количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), бактерии группы кишечных палочек - БГКП (колиформы), бактерии семейства Enterobacteriaceae, энтерококки; условно-патогенные микроорганизмы, к которым относятся Е. coli, Staphylococcus aureus, бактерии рода Proteus, В. cereus и сульфитредуцирующие клостридии, Vibrio parahaemolyticus; патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы и Listeria monocytogenes, бактерии рода Yersinia; микроорганизмыпорчи,ккоторымотносятсядрожжи,плесневыегрибы,молочнокислыемикроорганизмы; микроорганизмы заквасочной микрофлоры и пробиотические микроорганизмы (молочнокислые микроорганизмы, пропионовокислые микроорганизмы, дрожжи, бифидобактерии, ацидофильные бактерии и другие) - в продуктах с нормируемым уровнем биотехнологической микрофлоры и в пробиотических продуктах.

Просмотров работы: 69