VI Международный конкурс научно-исследовательских и творческих работ учащихся

Старт в науке

Изучение влияния препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови и мочи у крыс

• Авторы
• Руководители
• Файлы работы
• Наградные документы

Айрапетян Т.Ж. 1

---

1МБОУ СОШ с углублённым изучением английского языка №12 города Пятигорска

Сергеева Е.О. 1

---

1Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО(Волгоградский Государственный Медицинский Университет МЗ РФ)

Работа в формате PDF

171.5 KB

Автор работы награжден дипломом победителя III степени

Диплом школьникаСвидетельство руководителя

Введение

Защитным барьером организма от чужеродных агентов являются миндалины. Миндалины — это лимфоидные образования за дужками нёба. Функция миндалин заключается в активном формировании иммунитета: поступающие с воздухом и пищей чужеродные вещества — антигены — соприкасаются с поверхностью миндалин, вызывая в них производство биологически активных защитных веществ и клеток, которые затем разносятся по всему организму и предупреждают развитие болезни. При воздействии различных неблагоприятных внешних и внутренних факторов на организм происходит ослабление защитных функций миндалин и возникает инфекционно-воспалительный процесс, одним из проявлений которого является боль в горле. Каждый житель Земли хотя бы раз испытывал боль в горле, независимо от пола, возраста и места его дислокации на планете. Проявляется боль чаще всего при глотании.

Боль в горле – один из самых частых симптомов, сопровождающий большинство респираторных инфекций [3]. Боль в горле может носить самый разнообразный характер: острая, режущая, тупая, ноющая, пульсирующая и т.д. Она может быть как локальной (посередине, справа или слева, с обеих сторон), так и по всему горлу. Боль в горле может настигнуть человека в любое время года. В тёплое время года вероятность боли в горле также высока, как и в холодное. Когда болит горло, то это означает, что на участке от спинки языка и миндалин до голосовых связок имеется воспаление [1].Всё многообразие причин возникновения боли в горле можно объединить в 2 группы: инфекционные и неинфекционные. Инфекционные: влияние болезнетворных микроорганизмов, таких как бактерии, вирусы и грибы, вызывающих поражение слизистой глотки и миндалин; неинфекционные: воздействие на слизистую раздражителя со стороны внешней среды: загрязнённая окружающая среда, дым от курения, термическое действие при употреблении холодной и горячей пищи, механические травмы (рыбные косточки, медицинские манипуляции кость и т.д.).

Инфекционные причины боли в горле встречаются чаще неинфекционных. Самой распространённой причиной боли в горле являются вирусные (простудные) заболевания.

Вторая, по распространенности, причина боли в горле — это ангина. Нелеченные заболевания верхних и нижних дыхательных путей, особенно на фоне ослабления иммунитета, могут сильно ухудшить самочувствие больного, в некоторых случаях привести к нарушениям функции органов дыхания и слуха.

При всем многообразии причин возникновения боли в горле, существует единая клиническая картина симптомов воспаления:

БОЛЬ — ОТЁК — ПОКРАСНЕНИЕ.

Таким образом, инициирующим фактором для болей в горле является инфекция, а причиной сильных болей в горле является воспаление и отек. Кроме того, в слизистой горла находится большое количество нервных окончаний, поэтому боль в горле всегда имеет разнообразные оттенки (першение, жжение, пульсирование, острая боль и т.д.) и чревата осложнениями.

Провизоры предлагают множество различных препаратов, обладающих антисептическим и обезболивающим эффектом. Пастилки и леденцы, таблетки для рассасывания и растворы для полоскания – выбрать действительно не просто [2]. Леденцы в отличие от полосканий удобно хранить и использовать, но при полоскании эффективность выше, хотя это более трудоемкая процедура. Лекарственной формой, совмещающей в себе удобство и эффективность, является спрей для горла [3].

Спрей ОРАЛСЕПТ® - один из главных представителей нового поколения спреев для горла и полости рта. Его главные достоинства - эффективность, удобство в применении (благодаря складывающейся насадке) и универсальность. Большинство средств, которые применяются для лечения боли в горле, относятся к антисептикам. На этом фоне ОРАЛСЕПТ® значительно выигрывает, так как спрей оказывает комплексное действие: противовоспалительное, местное обезболивающее, антисептическое (против широкого спектра микроорганизмов) и противогрибковое. Достигается это в основном благодаря главному активному компоненту в составе ОРАЛСЕПТА^®, который называется бензидамина гидрохлорид. Это вещество относится к группе нестероидных противовоспалительных средств.

Благодаря тому, что в состав ОРАЛСЕПТА^® входит бензидамин, этот спрей можно назначать при большом спектре заболеваний ЛОР-органов и ротовой полости, а также при стоматологических заболеваниях.

Эффективность ОРАЛСЕПТА® во многом объясняется его химической структурой- в отличие от большинства средств своей группы он не содержит карбоксильную группу. Это придает ему щелочные свойства, благодаря которым бензидамин легко проникает непосредственно в очаг воспаления с его кислым рН.

Бензидамина гидрохлорид — НПВС, производное индазола, без карбоксильной группы. Отсутствие карбоксильной группы придает следующие особенности: бензидамин является слабым основанием (тогда как большинство НПВС — слабые кислоты), обладает высокой липофильностью, по градиенту pH хорошо проникает в очаг воспаления (где рН ниже) и накапливается в терапевтических концентрациях.

Оказывает противовоспалительное и местное обезболивающее действие, обладает антисептическим (против широкого спектра микроорганизмов), а также противогрибковым действием.

Противовоспалительное действие препарата обусловлено уменьшением проницаемости капилляров, стабилизацией клеточных мембран вследствие торможения синтеза и инактивации ПГ, гистамина, брадикинина, цитокинов, факторов комплемента и других неспецифических эндогенных повреждающих факторов.

Бензидамин подавляет продукцию провоспалительных цитокинов, особенно ФНО-α, в меньшей степени — ИЛ-1β. Основной особенностью бензидамина является то, что, являясь слабым ингибитором синтеза простагландинов, он демонстрирует мощное ингибирование провоспалительных цитокинов. По этой причине бензидамин может классифицироваться как цитокинподавляющий противовоспалительный препарат.

Местноанестезирующее действие бензидамина связано со структурными особенностями его молекулы, подобной местным анестетикам. Анальгезирующее действие обусловлено косвенным снижением концентрации биогенных аминов, обладающих альгогенными свойствами, и увеличением порога болевой чувствительности рецепторного аппарата; бензидамин также блокирует взаимодействие брадикинина с тканевыми рецепторами, восстанавливает микроциркуляцию и снижает болевую чувствительность в очаге воспаления.

Бензидамин оказывает антибактериальное действие за счет быстрого проникновения через мембраны микроорганизмов с последующим повреждением клеточных структур, нарушением метаболических процессов и лизосом клетки.

Длительность курса лечения определяется заболеванием и составляет: 4-7 дней после травм и операций; 4-15 дней при воспалениях в полости рта и глотки; 6-25 дней при поражениях десен и стоматологических болезнях [4].

Цель

Целью данного исследования явилась оценка влияния препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови и мочи у крыс при изучении общетоксического действия, проводимого в условиях хронического эксперимента.

Задачи

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

- из крови путем центрифугирования получить сыворотку;

в сыворотке крови определить следующие биохимические показатели: содержание глюкозы, общего белка и его фракций, мочевины, креатинина, мочевой кислоты, общего билирубина и его фракций, холестерина, триглицеридов (ТРГ), активности аланинаминотрансферазы (АлАт), аспартатаминотрансферазы (АсАт), щелочной фосфатазы (ЩФ).

- исследовать физико-химические свойства мочи (цвет, прозрачность, запах, плотность и рН);

- провести определение в моче некоторых патологических компонентов: белка, глюкозы, кетоновых (ацетоновых) тел, гемоглобина и желчных пигментов, нитритов, лейкоцитов.

Материалы и методы

Данное исследование выполнено на аутбредных крысах Wistar обоего пола весом 180-240 г. Во время эксперимента животные содержались в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 22±2˚С, относительная влажность 65±5%. Для размещения животных применялись макролоновые клетки Т-3 оборудованные стальными решетчатыми крышками, с кормовым углублением. В качестве подстилочного материала применялись древесные опилки нехвойных пород древесины. Животные содержались на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к корму (Полнорационный комбикорм рецепт ПК-120 для содержания лабораторных животных, ГОСТ Р 50258-92, производитель ООО «Лабораторкорм») и воде. Вода водопроводная подавалась в стандартных питьевых бутылочках. Подстил, клетки и аксессуары, поилки для питья, менялись еженедельно.

Объект исследования: «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» - прозрачный раствор желто-зеленого цвета, с ароматом мяты перечной.

Состав исследуемого препарата на 100 мл:

Активное вещество:

бензидамина гидрохлорид 0,15 г мг

Способ введения препаратов животным – орошение ротовой полости. Препарат вводили в 2-х дозах: 1,275 мг/кг (близка к терапевтической дозе и 12,75 мг/кг (токсическая доза).

Для проведения опыта было использовано 3 групп животных по 20 особей в каждой группе (10 самок и 10 самцов). Животные 1-й группы служили контролем и получали воду очищенную в эквиобъемном вводимым препарату количестве. Животные 2-й группы получали исследуемый объект в дозе 1,275 мг/кг, 3-ьй группы – исследуемый объект в дозе 12,75 мг/кг. Для оценки отдаленных результатов длительного введения исследуемых препаратов используют еще 3 группы по 12 животных (6 самок и 6 самцов на максимальной дозе), забой которых осуществляют через 2 недели после окончания введения исследуемого объекта.

Введение веществ производили ежедневно утром в одно и то же время 7 дней в неделю до кормления животных. Продолжительность эксперимента составила 30 дней.

В ходе проведения эксперимента ежедневно наблюдали за общим состоянием животных, потреблением пищи и воды, состоянием волосяного покрова и слизистых оболочек, поведением. Еженедельно измеряли массу тела крыс.

На 31-й и 45-й день у крыс опытных групп собирали мочу. В исследуемых группах осуществляли эвтаназию путем декапитации с забором крови и проводили биохимические исследования для оценки влияния этого препарата на обменные, метаболические, дезинтоксикационные, экскреторные функции организма животных. Забор крови осуществляли методом свободного истечения после декапитации животных под хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг).

Из крови путем центрифугирования получали сыворотку, в которой определяли следующие биохимические показатели: содержание глюкозы, общего белка и его фракций, мочевины, креатинина, мочевой кислоты, общего билирубина и его фракций, холестерина, триглицеридов (ТРГ), аланинаминотрансферазы (АлАт), аспартатаминотрансферазы (АсАт), щелочной фосфатазы (ЩФ). Все показатели определялись на автоматическом биохимическом анализаторе BS-380 (Mindray).

Результаты обрабатывали методом вариационной статистики 5.

Результаты и их обсуждение

Глава 1 Оценка влияния препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови

У самцов, получавших максимальную дозу исследуемого препарата , достоверно относительно контроля повысилась активность щелочной фосфатазы на 57%. У самцов и у самок, получавших препараты в минимальной и максимальной дозах отмечено незначительное снижение уровня общего билирубина. Причем в группах, получавших максимальные дозы -12,75 мг/кг это снижение является достоверным. У самцов при использовании опытного средства такая же картина наблюдается для показателей прямой билирубин и свободный билирубин, у самок – такое снижение отмечено для свободного билирубина. Между данными показателями групп, получавших исследуемый препарат и препарат сравнения отличий не было.

У самок и самцов, получавших исследуемый препарат в дозе 12,75 мг/кг отмечено незначительное повышение креатинина. У самок наблюдается повышение креатинина и в случае применения препаратов в терапевтической дозе -1,275 мг/кг.

Введение препарата сопровождалось развитием гипергликемии. Так у самок отмечали достоверный рост уровня глюкозы при использовании исследуемого препарата в обеих дозах, причем без выраженной дозозависимости. А в группе крыс-самцов регистрировали гипергликемию только при использовании препарата в максимальной дозе. Кроме того, у крыс-самцов зарегистрировали достоверный подъем содержания холестерина в группе с исследуемым препаратом в дозе 1,275 мг/кг. В оставшихся группах отмечалась сходная динамика изменения концентрации холестерина, но без достоверности по отношению к контролю. Остальные изучаемые биохимические показатели остались без изменений.

Таблица 1 - Влияние препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови крыс самцов (n=10)

САМЦЫ Группа	АлАТ (Е/л)	АсАТ (Е/л)	ЩФ (Е/л)	ОБ (мкмоль/л)	ПБ (мкмоль/л)	СБ (мкмоль/л)	Мочевина (мкмоль/л)	Креатинин (мкмоль/л)	Мочев. к-та (мкмоль/л)
Контроль	70,52	253,95	437,11	7,76	1,23	6,53	8,29	60,75	71,02
	±2,96	±36,51	±31,42	±0,57	±0,02	±0,56	±0,41	±1,81	±1,68
Бензидамин 1,275 мг/кг,	64,28	177,36	537,06	6,19	1,15	5,05	6,97	67,34	67,55
	±3,08	±9,03	±32,56	±0,25*	±0,04	±0,25* -23%	±0,48	±1,64* +11%	±1,39
Бензидамин 12,75 мг/кг	78,19	190,69	561,49	5,78	1,12	4,91	7,51	66,26	66,26
	±3,84	±9,57	±38,93* +28%	±0,23* -26%	±0,04* -10%	±0,29* -25%	±0,19	±2,12 +9%	±2,35
Примечание: * - достоверно по отношению к контролю

Таблица 2 - Влияние препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови крыс самок (n=10)

САМКИ Группа	АлАТ (Е/л)	АсАТ (Е/л)	ЩФ (Е/л)	ОБ (мкмоль/л)	ПБ (мкмоль/л)	СБ (мкмоль/л)	Мочевина (мкмоль/л)	Креатинин (мкмоль/л)	Мочев. к-та (мкмоль/л)
Контроль	69,64	220,81	276,15	8,54	1,08	7,46	7,15	64,69	76,18
	±4,57	±67,76	±30,45	±0,62	±0,05	±0,58	±0,27	±1,07	±2,66
Бензидамин 1,275 мг/кг,	56,75	193,36	327,87	6,71	1,09	5,62	7,90	72,87	79,49
	±5,58	±13,06	±37,12	±0,52* -21%	±0,03	±0,50* -25%	±0,29	±2,56* +13%	±3,05
Бензидамин 12,75 мг/кг	74,9	187,78	355,00	7,24	1,03	6,21	6,94	65,23	70,25
	±3,70	±11,74	±34,80	±0,24	±0,04	±0,59	±0,32	±1,20	±1,88
Примечание: * - достоверно по отношению к контролю

Таблица 3 - Влияние препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови крыс самцов (n=10)

САМЦЫ Группа	ОБС (г/л)	Альбумины (г/л)	Глобулины (г/л)	Глюкоза (ммоль/л) :1,5	Холестерин (ммоль/л)	ТРГ (ммоль/л)	Коэф. де Ритисса	А/Г
Контроль	57,43	27,46	32,97	6,29	1,26	1,02	3,64	0,84
	±2,95	±0,47	±0,69	±0,88	±0,05	±0,24	±0,55	±0,02
Бензидамин 1,275 мг/кг,	57,96	26,45	31,51	8,66	1,42	0,90	3,02	0,84
	±0,79	±0,38	±0,62	±1,49	±0,07	±0,18	±0,12	±0,02
Бензидамин 12,75 мг/кг	60,43	27,34	33,09	9,6	1,52	1,23	2,45	0,83
	±0,86	±0,33	±0,77	±0,75* +53%	±0,07*	±0,25	±0,08	±0,02
Примечание: * - достоверно по отношению к контролю

Таблица 4 - Влияние препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели сыворотки крови крыс самок (n=10)

САМКИ Группа	ОБС (г/л)	Альбумины (г/л)	Глобулины (г/л)	Глюкоза (ммоль/л)	Холестерин (ммоль/л)	ТРГ (ммоль/л)	Коэф де Ритисса	А/Г
Контроль	64,92	29,97	34,95	6,04	1,36	1,43	3,17	0,86
	±0,52	±0,33	±0,51	±1,01	±0,05	±0,28	±0,22	±0,02
Бензидамин 1,275 мг/кг,	63,89	28,41	35,49	8,50	1,31	1,38	3,48	0,80
	±0,69	±0,34	±0,48	±0,62* +41%	±0,05	±0,25	±0,14	±0,01
Бензидамин 12,75 мг/кг	63,36	27,88	35,48	8,76	1,38	1,40	2,53	0,79
	±0,65	±0,29	±0,43	±1,18* +45%	±0,07	±0,23	±0,26	±0,01
Примечание: * - достоверно по отношению к контролю

Через 14 дней после отмены препаратов как у самцов, так и самок, получавших максимальную дозу препаратов, достоверных отличий между показателями опытных групп и контрольных не было по всем изученным показателям

Глава 2 Оценка влияния препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые биохимические показатели мочи у крыс

При комплексной дифференциальной диагностике патологических состояний довольно часто прибегают к исследованию диуреза и состава мочи. Многообразие этиологических факторов заболеваний почек реализуется в ограниченном спектре морфологических форм. Тем важнее для установления диагноза детальный анализ нюансов

клинико-лабораторных признаков нефрологического заболевания. Исследование экскреции с мочой многочисленных веществ занимает также важное место в диагностике эндокринологических, желудочно-кишечных, метаболических, ревматологических, гематологических и других заболеваний [7].

Показатели общего анализа мочи могут колебаться в довольно широких пределах, причем данные флюктуации могут быть физиологическими или патологическими. Физиологические колебания являются вариантом нормы, а патологические отражают какое-либо заболевание.

Повышение или понижение относительно нормы какого-либо показателя невозможно оценивать однозначно, и делать вывод о наличии заболевания. Результаты анализов могут помочь выяснить возможную причину нарушений, которые могут находиться лишь на стадии синдрома, а не сформировавшегося заболевания. Поэтому своевременное выявление отклонений в анализах поможет начать лечение и предотвратить прогрессирование заболевания. Также показатели анализов могут использоваться для контроля над эффективностью лечения.

Моча у животных контрольных групп была прозрачна, слабо-желтого или соломенного цвета, без резкого запаха. Микроскопическое исследование осадка мочи показало отсутствие цилиндров и единичных эритроцитов в препарате у животных контрольных групп. Изучение химического состава мочи при помощи тест полосок на анализаторе мочи CL-50 HTI показало отсутствие в ней патологических компонентов - глюкозы, белка, кетоновых тел, билирубина, уровень уробилиногена был в норме. Окраска индикаторных зон, отвечающих за определение количества лейкоцитов и эритроцитов, указала на отсутствие в моче лейкоцитов и эритроцитов. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии какой – либо патологии [5].

Исследование образцов мочи опытных животных показало следующее. Моча самок и самцов, получавших бензидмин, имела слабо желтую окраску, запах характерный, пробы были прозрачные.

Оценка количества эритроцитов при помощи тест полосок показала, что они присутствуют у единичных крыс в количестве 10-25 эритроцитов на 1 мкл как у самок, так и у самцов, получавших препарат в дозе 12,75 мг/кг, т.е. наблюдается развитие незначительной гематурии. В опытных группах, получавших препарат отмечалось развитие умеренной лейкоцитурии, сопровождающейся увеличением количества лейкоцитов: в большинстве случаев оно составляло от 15 до 70 лейкоцитов на 1 мкл при использовании дозы 12,75 мг/кг. Эти изменения были аналогичны у животных, получавших опытный и исследуемый препараты. Незначительное содержание эритроцитов и лейкоцитов, определяемое полуколичественными методами анализа, является вариантом нормы для данного вида животных.

Изучение интенсивности диуреза показало, что после 2,5% водной нагрузки, в группах животных изменений не наблюдается.

Во всех опытных группах не было обнаружено присутствия патологических компонентов мочи (глюкоза, кетоновые тела, билирубин). Значения рН мочи опытных групп, как самок, так и самцов, получавших препараты в дозах 1,275 мг/кг и 12,75 мг/кг, колебались в пределах 6,3-6,7 [6].

Таблица 5 - Влияние 30-дневного применения препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза»на некоторые показатели мочи у крыс-самцов (M±m, n=10)

Таблица 6 - Влияние 30-дневного применения препарата «Бензидамин, спрей для местного применения дозированный, 255 мкг/доза» на некоторые показатели мочи у крыс-самок (M±m, n=10)

Через 14 дней после отмены в моче животных не наблюдается патологических элементов. Достоверных отличий от контрольных животных по всем показателям не отмечено.

Заключение

Было установлено, у самцов, получавших максимальную дозу препарата, достоверно относительно контроля повысилась активность щелочной фосфатазы и содержание креатинина и мочевой кислоты. У самцов, получавших исследуемый препарат достоверно снизилось содержание общего билирубина за счёт снижения фракций прямого и непрямого билирубина. У самок общий билирубин был снижен при применении препаратов в максимальной дозе и минимальной дозе в основном за счёт фракции свободного билирубина. Уровень креатинина снизился достоверно по сравнению с контролем у самок под влиянием препарата в дозе 1,275 мг/кг. Во всех опытных группах отмечено повышение содержания глюкозы, как у самцов, так и у самок после 30 -ти дневного приема препаратов. Это повышение полностью ликвидировалось через две недели после отмены препаратов. Между данными показателями групп, получавших препараты в двух дозах, отличий не было, изменения произошли симметрично дозе.

Показатели мочи крыс самцов не свидетельствуют о нарушении работы почек.

После отмены введения препарата наблюдалось быстрое улучшение общего состояния животных и через 2 недели внешний вид, поведение, потребление пищи и воды у животных контрольных и опытных групп не отличались.

Список литературы

Пальчун, В.Т. Отоларингология:Руководство для врачей/ В.Т. Пальчун, А.И. Крюков/ М.: медицина, 2001, с. 257-315.

Полякова, Т.С. Применение препарата Гексализ в лечении больных воспалительными заболеваниями ротокглотки/ Т.С. Полякова, А.В. Гуров, Н.В Карцева// Вестник отолорингологии.-2012.-№2.-С.5-12.

Славский, А.Н.Боль в горле: обоснование оптимального выбора препарата/ А.Н. Славский, И.Ю. Мейтель// Медицинский совет-2016.-№18.-С.128-132

Справочник Машковского. http://mashkovsky.ru

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Под редакцией Е.А. Кост. – М.: Медицина, 1975. – 383 с.

Строев, Е.А. Практикум по биологической химии: Учеб. Пособие для фармац. Вузов и фак. / Строев Е.А., Макарова В.Г. – М.: Высшая школа, 1986. – 231 с.

Сура, В.В. Анализ мочи в истории медицинской диагностики / В.В. Сура, О.И. Камаева // Терапевтический архив – 1998. - №6. – С. 5-7.