ВВЕДЕНИЕ
В период обострения и распространения вирусных и бактериальных инфекций врачи рекомендуют применять профилактические меры для защиты своего организма. Например, промывание носа специальными растворами, усиление гигиенических мер, при нахождении в общественных местах надевать медицинские маски, поддержание иммунитета с помощью различных медикаментов или использования народных средств. Моя мама пользуется проверенным, по ее словам, способом профилактики – лук и чеснок. Она из смеси чеснока и лука делает кашицу и раскладывает ее по дому. На мой вопрос «как это помогает?» она ответила: «Лук и чеснок убивает микробы». Я захотела изучить этот вопрос более детально.
Проблема, которую я могу попробовать решить своей работой – отсутствие профилактики вирусных и бактериальных заболеваний среди школьников. В качестве объекта исследования я решила взять те растения, которые можно найти у каждого школьника дома – это чеснок и лук репчатый. Предмет исследования: влияние на микроорганизмы фитонцидов чеснока и лука репчатого.
Теоретическая значимость моего исследования заключается в том, что многие школьники не только обратят внимание на моё исследование, но и сделают выводы о необходимости профилактики вирусных и бактериальных заболеваний для сохранения собственного здоровья. Практическая значимость моей работы состоит в том, что она может быть использована школьниками для повышения образовательного уровня при изучении тем по биологии. На практике я использовала методы микробиологии, которыми я могу воспользоваться для более глубокого изучения темы своего исследования в будущем.
На сегодняшний день существуют работы, посвященные влиянию фитонцидов растений на различные микроорганизмы. Но я решила изучить влияние фитонцидов на микроорганизмы именно в воздушной среде. Мне интересно, могут ли фитонциды «очистить» воздух от микроорганизмов. И в этом заключается новизна моего исследования.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ
Изучая проблему моего исследования в разных литературных источниках, я выдвинула следующую гипотезу: фитонциды чеснока и лука репчатого оказывают губительное воздействие на микроорганизмы, находящиеся в воздушной среде.
Для опровержения или подтверждения своей гипотезы я поставила перед собой следующую цель: выявить характер влияния фитонцидов чеснока и лука репчатого на микроорганизмы, находящиеся в воздушной среде.
Для достижения цели я поставила перед собой следующие задачи:
1) найти информацию в различных источниках о проблеме исследования;
2) изучить методику посева спор бактерий на питательную среду из воздуха;
3) приготовить питательную среду для эксперимента;
4) разработать план эксперимента;
5) провести эксперимент по определению характера влияния фитонцидов чеснока и лука репчатого на микроорганизмы;
6) проанализировать полученные результаты и сделать выводы.
В ходе работы были использованы следующие методы исследования:
1) изучение литературы и других источников информации по теме;
2) эксперимент (посев бактерий на плотную питательную среду в чашке Петри методом осаждения из воздуха);
3) статистический метод;
4) анализ.
Бактерии – самые древние прокариотические клеточные организмы. Они играют важнейшую роль разрушителей органического вещества, фиксаторов азота, являются возбудителями заболеваний животных и человека. В медицине бактерии используют для получения вакцин, антибиотиков, в пищевой промышленности – для получения молочнокислых продуктов, спиртов. Бактерии также являются объектами генной инженерии [1].
В большинстве случаев бактерии – это одноклеточные формы, но некоторые виды образуют цепочки из слабо связанных клеток, которые бывают палочковидными, сферическими или спиральными. Бактериальная клетка отличается простотой в строении (рис.1). Она заключена в плотную жесткую оболочку, окруженной снаружи слизистой капсулой. У бактерий отсутствует ядро и другие мембранные органоиды. У многих есть жгутики, участвующие в движении клетки [2].
Рисунок 1 – Строение бактериальной клетки.
При неблагоприятных условиях (при недостатке пищи, влаги, резких изменениях температуры) многие бактерии переходят в состояние покоя. Цитоплазма бактериальной клетки, сжимаясь, отходит от материнской оболочки, округляется и образует внутри нее на своей поверхности новую, более плотную оболочку. Такую бактериальную клетку называют спорой [3].
Кроме спор бактерий в воздухе могут находиться различные вирусы и споры плесневых грибов, которые так же могут вызвать у человека различные заболевания.
Одним из факторов, влияющих на рост и развитие микроорганизмов, является наличие в окружающей среде бактерицидных веществ. Например, фитонцидов.
Фитонциды (от греч. phyton – «растение» и лат. caedo – «убиваю») – образуемые растениями биологически активные вещества, убивающие или подавляющие рост и развитие микроорганизмов. Открыты советским профессором, доктором биологических наук Борисом Петровичем Токиным в 1928 г. Образование фитонцидов свойственно всем растениям. Различают летучие (могут испаряться) и нелетучиефитонциды тканевых соков. Нелетучие фитонциды содержатся во всех растениях. Мощность и спектр антимикробного действия фитонцидов весьма разнообразны у разных видов растений. Например, фитонциды чеснока, лука, хрена убивают многие виды простейших, бактерий и низших грибов в первые минуты и даже секунды. Выделение фитонцидов усиливается при повреждении растений: оно и понятно, ведь именно в это время растению особенно важно защитить себя от инфекции. Защитная роль фитонцидов проявляется не только в уничтожении микроорганизмов, но и в подавлении их размножения. Это свойство растений человек активно использует и для защиты своего собственного здоровья. Антимикробные свойства фитонцидов обусловили большое число исследований по использованию их в медицине, ветеринарии, защите растений, при хранении плодов и овощей, в пищевой промышленности и др. [4].
Для достижения поставленной цели я использовала бактериологический метод исследования. Посев (бакпосев) — один из методов культивирования микроорганизмов на питательных средах. Питательная среда – это однокомпонентный или многокомпонентный субстрат, применяемый для культивирования микроорганизмов или культур клеток высших организмов. Требования, предъявляемые к средам: быть питательными, стерильными, иметь оптимальную кислотность и влажность [5].
Основное требование при работе с микроорганизмами – соблюдение асептики, т. е. таких условий, при которых в пробирку с изучаемой культурой не смогли бы попасть другие микроорганизмы (например, из воздуха, с предметов, используемых в процессе выполнения работы). Кроме того, нужно иметь в виду, что среди микроорганизмов многие условно патогенны, что требует повышенного внимания и аккуратности в работе. Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические петли, иглы, шпатели. Выращивают микроорганизмы в пробирках, колбах или чашках Петри [6].
В результате посева на питательной среде образуются так называемые колонии – видимые скопления микроорганизмов одного вида, которые формируются в результате размножения одной клетки. Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим культуральным признакам.
Учитывая степень оснащенности и условий школьной лаборатории, мы выбрали наиболее простую в плане приготовления питательную среду – это мясо-пептонный агар (МПА). Для выращивания микроорганизмов использовали чашки Петри. Для своего исследования я выбрала кабинет математики и учительскую, как самые часто посещаемые в течение рабочего дня. Эти кабинеты, по моей просьбе, в день посева не проветривались и в них не проводилась влажная уборка с использованием каких-либо моющих и дезинфицирующих средств.
Этапы эксперимента:
1. Стерилизация чашек Петри.
Чашки Петри мы стерилизовали в кипящей воде в течение 10-15 минут. После чего провели дополнительную стерилизацию в электрическом духовом шкафу при температуре 150 градусов в течение 10 минут. Чашки Петри остужались закрытыми.
2. Приготовление питательной среды.
Для приготовления МПА мы использовали нежирное мясо (говядина). В течение суток мясо выдерживали в холодной воде, чтобы избавиться от крови. После чего мясо варили около 1,5-2 часов. Полученный бульон остудили и процедили через марлю, после чего профильтровали с помощью фильтровальной бумаги. Объем полученного бульона – 700 мл. В бульон добавили агар из расчета ½ чайной ложки на каждые 60 мл жидкости. Это количество подходит для одной чашки Петри. Смесь разогрели на водяной бане до полного растворения агара. После этого полученную питательную среду остудили. В нижнюю половину чашек Петри залили питательную среду тонким слоем и быстро закрыли крышкой. Чтобы не занести бактерии из воздуха, все действия были проведены возле горящей спиртовки.
3. Посев.
Для посева спор бактерий и грибов использовался метод осаждения из воздуха. Все пробы были подписаны и помещены в теплое место (таблица 1).
Бактерии наиболее активно растут при +37 градусах. Наиболее подходящее место в школе – у батареи. Пробы накрыли плотной тканью и оставили на сутки. Пробы №7 и №11 сутки хранились в холодильнике.
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТА
Все наблюдения по эксперименту были занесены в таблицу и проанализированы.
Таблица 1 – Результаты эксперимента.
№ пробы |
Характеристика пробы |
День наблюдения / описание проб |
|
1 день |
4 день |
||
1 |
Контроль на чистоту чашек и питательной среды |
нет колоний |
5 колоний |
2 |
Контрольная проба воздуха (математика) лук |
11 колоний |
21 колония, кольцо по периферии |
3 |
Контрольная проба воздуха (учительская) чеснок |
20 колоний |
22 колонии |
4 |
Проба воздуха (математика) 15 минут |
15 колоний |
более 100 колоний, колония плесени, кольцо по периферии |
5 |
Проба воздуха (математика) 20 минут |
20 колоний |
32 колонии, кольцо по периферии |
6 |
Проба воздуха (математика) 25 минут |
27 колоний |
76 колоний, кольцо по периферии |
7 |
Проба воздуха (математика) через сутки |
посев |
9 колоний, кольцо по периферии |
8 |
Проба воздуха (учительская) 15 минут |
21 колония |
37 колоний, кольцо по периферии |
9 |
Проба воздуха (учительская) 20 минут |
27 колоний |
52 колонии, кольцо по периферии |
10 |
Проба воздуха (учительская) 25 минут |
28 колоний |
сплошной слой колонии, подсчет невозможен |
11 |
Проба воздуха (учительская) через сутки |
посев |
18 колоний, кольцо по периферии |
Рисунок 2 – Результаты посева из кабинета математики (лук).
Рисунок 3 – Результаты посева из учительской (чеснок).
Из гистограмм мы можем увидеть, что происходит незначительное снижение количества колоний в пробах посева из воздуха на следующий день, как в кабинете математики, так и в учительской. В первые 30 минут после внесения в помещения кашиц лука и чеснока снижения степени загрязнения воздуха не наблюдается, а даже увеличивается.
ВЫВОДЫ
1) Изучена литература по теме исследования.
2) Теоретически изучена методика приготовления питательной среды МПА.
3) Практически освоена методика посева спор бактерий и грибов путем осаждения из воздуха.
4) По результатам эксперимента были получены данные, по которым нельзя сделать однозначных выводов о губительном воздействии фитонцидов чеснока и лука репчатого на микроорганизмы, находящихся в воздухе. Происходит незначительное снижение количества колоний в пробах посева из воздуха на следующий день. Однако мы не смогли объяснить увеличение количества колоний в пробах воздуха в первые 30 минут эксперимента. Гипотеза не подтвердилась: фитонциды чеснока и лука репчатого воздух от микроорганизмов не очищают.
5) Работа по данной теме может быть продолжена, однако необходимо пересмотреть ход эксперимента. Необходима консультация специалистов в области микробиологии и ботаники.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Лернер Г.И. ЕГЭ-2009: Биология. Репетитор / Г.И. Лернер. – М.: Эксмо, 2008. – 320 с.;
2. Келина Н.Ю. Экспресс-курс химии и биологии для школьников и абитуриентов / Н.Ю. Келина, Н.В. Безручко. – Ростов н/Д: Феникс, 2008. – 614 с.;
3. Биология: растения, бактерии, грибы, лишайники: учебник для 6-7 кл. общеобразоват.учреждений / Т.И. Серебрякова, А.Г. Еленевский, М.А. Гуленкова и др. – 2-е изд. – М.: Просвещение, 1996. – 224 с.;
4. Большая энциклопедия растений: для школьников и студентов / науч. редактор
к. г. н. Вильчек Г. Е. –М.: ОЛМА Медиа Групп, 2007 г. – 623 с.
5. Свободная энциклопедия Википедия – (https://ru.wikipedia.org);
6. Микробиология с основами вирусологии: методы микроэкологического исследования наземных, водных и воздушных экосистем: лаб.практикум / С.В. Прудникова, Н.Д. Сорокин, Н.И. Сарматова и др. – Красноярск: ИПК СФУ, 2008
Приложение 1 – Пробы воздуха на 4 день наблюдения.
№2 - Контрольная проба воздуха №3 - Контрольная проба
(математика) лук. воздуха (учительская) чеснок.
№4 - Проба воздуха (математика) №5 - Проба воздуха
через 15 минут (математика) еще через 5 минут
№6 - Проба воздуха (математика) №7 - Проба воздуха (математика)
еще через 5 минут через сутки
№8 - Проба воздуха (учительская) №9 - Проба воздуха (учительская)
через 15 минут еще через 5 минут
№11 - Проба воздуха
(учительская) через сутки